上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer, EOC）在妇科恶性肿瘤中死亡率居于首位，由于缺乏早期诊断方法和预防筛查措施，约75%的患者发现时已属于晚期。目前卵巢癌的治疗采用手术联合化疗的综合治疗手段，尽管治疗手段的进步使卵巢癌患者的治疗取得了成效，但仍有60-80%的患者死于该病，最主要的原因就是术后高复发率及化疗耐药，因此，迫切需要一种新的治疗手段用于卵巢癌的临床治疗。表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor, EGFR）信号通路引起了学者们的广泛关注。有证据显示，许多肿瘤中存在EGFR的过表达和异常活化，其中包括卵巢癌[1-2]，EGFR活化后通过激活PI3K/Akt及Ras/Raf/MEK/ERK等在内的下游信号通路参与肿瘤的增殖、凋亡、血管生成、粘附、侵袭、转移等过程[3]，另外，研究表明EGFR信号通路可能介导化疗耐药的形成。吉非替尼（Iressa）是一种EGFR小分子酪氨酸激酶抑制剂，通过与ATP竞争受体胞内区结合位点抑制EGFR的自身磷酸化过程。已有报道应用吉非替尼阻断EGFR信号通路的活化，可以增加化疗药物的敏感性。因此将EGFR信号通路作为药物作用靶点为逆转卵巢癌耐药提供了可能。目的：通过抑制EGFR信号通路的活化，观察其对顺铂耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP增殖、凋亡的影响，及逆转顺铂耐药的效果，初步探讨EGFR信号通路的活化与顺铂耐药的关系。方法：1Western blot检测SKOV3及SKOV3/DDP细胞中EGFR、p-EGFR（活化的EGFR）蛋白的基础表达状态。2Western blot检测顺铂对SKOV3及SKOV3/DDP细胞中EGFR、p-EGFR蛋白表达的影响。3MTT法检测不同浓度的顺铂（0.625、1.25、2.5、5、10、20μg/ml）对SKOV3及SKOV3/DDP细胞增殖的影响，获得半数抑制浓度（IC50），并计算耐药指数。4MTT法检测不同浓度的吉非替尼（0.01、0.1、1、10、100μM）对SKOV3及SKOV3/DDP细胞增殖的影响。5MTT法检测1μM吉非替尼联合不同浓度的顺铂（0.625、1.25、2.5、5、10、20μg/ml）对SKOV3/DDP细胞增殖的影响，获得联用后顺铂的IC50，并计算耐药逆转倍数。6流式细胞术检测吉非替尼、顺铂、吉非替尼联合顺铂对卵巢癌细胞凋亡的影响。7Western blot检测吉非替尼、顺铂、吉非替尼联合顺铂对SKOV3/DDP细胞EGFR、p-EGFR及下游信号通路Akt、p-Akt（活化的Akt）、ERK、p-ERK（活化的ERK）蛋白表达的影响。8统计学方法：采用SPSS13.0统计软件进行数据统计，计量资料以均数±标准差表示，方差齐性检验，三组以上采用方差分析，组间差异采用LSD法，两组数据比较采用t检验，以α﹦0.05为检验水准，当P＜0.05时，差异有统计学意义；当P＞0.05时，差异无统计学意义。结果：1Western blot检测SKOV3及SKOV3/DDP细胞的EGFR、p-EGFR蛋白表达结果：SKOV3及SKOV3/DDP细胞中均存在EGFR及p-EGFR蛋白的表达，EGFR蛋白在亲本株与耐药株的表达量无显著差别（P>0.05），SKOV3/DDP细胞中p-EGFR蛋白的表达显著高于SKOV3细胞的表达，差异有统计学意义（P <0.05）。2Western blot检测顺铂对SKOV3及SKOV3/DDP细胞的EGFR、p-EGFR蛋白表达结果：顺铂处理前后，SKOV3及SKOV3/DDP细胞中EGFR蛋白的表达量无显著差别（P>0.05），顺铂处理后的SKOV3及SKOV3/DDP细胞中p-EGFR蛋白的表达量相比于顺铂未处理组的细胞明显增高，差异有统计学意义（P <0.05）。3MTT法检测顺铂对SKOV3及SKOV3/DDP细胞增殖影响的结果：顺铂对SKOV3细胞的IC50为3.74±0.03，SKOV3/DDP细胞的IC50为17.66±0.58，耐药指数为4.72。4MTT法检测吉非替尼对SKOV3及SKOV3/DDP细胞增殖影响的结果：吉非替尼可以抑制SKOV3及SKOV3/DDP细胞的生长，这种抑制作用呈剂量依赖性，当浓度为1μM时，抑制作用明显增加。同一浓度下吉非替尼对SKOV3细胞的抑制率高于SKOV3/DDP细胞的抑制率，差异有统计学意义（P <0.05）。5MTT法检测吉非替尼联合顺铂对SKOV3/DDP细胞增殖影响的结果：与单独应用顺铂相比，1μM的吉非替尼联合顺铂可增加对SKOV3/DDP细胞的抑制作用，联合作用后顺铂的IC50为7.42±0.15，逆转耐药倍数为2.38。6流式结果：在SKOV3/DDP细胞中，吉非替尼、顺铂、吉非替尼+顺铂的凋亡率分别为(7.52±0.63)%、(8.13±0.91)%、(17.33±0.84)%，均高于对照组（未加药物处理组）的凋亡率(0.28±0.12）%，差异有统计学意义（P <0.05），且联合组的凋亡率均高于单一用药组（P <0.05），但仍低于顺铂作用于SKOV3细胞诱导的凋亡率（23.03±1.23）%（P <0.05）。7Western blot检测不同处理组对SKOV3/DDP细胞EGFR、p-EGFR、 Akt、p-Akt、ERK、p-ERK蛋白表达的影响结果：与对照组相比，顺铂、吉非替尼，顺铂联合吉非替尼处理SKOV3/DDP细胞，EGFR、Akt及ERK蛋白表达量无显著差别（P>0.05）。顺铂处理后，p-EGFR及p-Akt、p-ERK蛋白的表达量增加，与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。吉非替尼处理后，EGFR及Akt、ERK的活性降低，与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。吉非替尼与顺铂联合处理后，p-EGFR及p-Akt、p-ERK蛋白的表达量显著减少，与单用顺铂组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论：1SKOV3/DDP细胞中p-EGFR蛋白的表达量显著高于SKOV3细胞中的表达，提示EGFR信号通路的异常活化可能参与了卵巢癌化疗耐药的过程。2顺铂可以诱导EGFR信号通路的活化，降低顺铂对卵巢癌的细胞毒作用，应用EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼可以协同顺铂增加SKOV3/DDP细胞的敏感性，部分逆转顺铂耐药，这可能与吉非替尼抑制顺铂诱导的EGFR信号通路的激活及Akt，ERK的活性有关。