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目的通过对血管性痴呆模型大鼠应用PI3K/Akt/m TOR通路抑制剂LY294002、雷帕霉素进行干预,观察PI3K、Akt、m TOR通路蛋白表达及对自噬相关蛋白LC3、Beclin1表达的影响,探讨PI3K/Akt/m TOR信号通路对血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬的调节作用。方法1动物分组192只健康雄性SD实验大鼠随机分为假手术组(Sham组)、血管性痴呆模型组(VD组)、PI3K抑制剂组(LY294002组)和m TOR抑制剂组(雷帕霉素组),每组大鼠再随机分为模型制备成功后的1、2、4、8周4个亚组(每组12只)。2血管性痴呆模型制备采用改良Pulsinelli四血管阻断法制备血管性痴呆大鼠模型。3给药方法侧脑室立体定位:Bregma点向左或右旁开0.9mm,向后1.5 mm,用微型牙科钻打孔,有明显穿破感后拔出。用微量进样器吸取10mmol/L的LY294002溶液10μl,沿钻孔缓慢进针,进针深度达3.8 mm,于5分钟内匀速缓慢注入,等留针5 min后缓慢拔针。雷帕霉素组方法同LY294002组。4采用免疫组织化学染色法检测各组大鼠海马CA1区PI3K、Akt、m TOR蛋白表达及定位。5采用免疫印迹法检测各组大鼠海马CA1区LC3II/LC3I比值、Beclin1蛋白的表达及变化情况。6采用荧光显微镜检测大鼠海马CA1区自噬相关蛋白LC3的表达及定位。7组织切片采用OLYMPUS摄像显微镜(400×)摄像,并应用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统进行数据分析;Western blot结果应用Image J图片分析系统进行分析。8应用SPSS17.0统计软件包进行数据分析与处理,计量资料以均数±标准差表示。多组间比较采用单因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1 PI3K免疫组化检测结果:与Sham组比较,VD组各时间点的PI3K蛋白表达均明显增高(P<0.05或P<0.01);与VD组比较,LY294002组与雷帕霉素组各个时间点PI3K蛋白表达无明显变化(P>0.05)。2 Akt免疫组化检测结果:与Sham组比较,VD组各时间点的Akt蛋白表达均明显增高(P<0.05或P<0.01);与VD组比较,LY294002组各个时间点的Akt蛋白表达均减少(P<0.05或P<0.01);雷帕霉素组各个时间点Akt蛋白表达无明显变化(P>0.05)。3 m TOR免疫组化检测结果:与Sham组比较,VD组各时间点的m TOR蛋白表达均明显增高(P<0.05或P<0.01);与VD组比较,LY294002组和雷帕霉素组各个时间点的m TOR蛋白表达均减少(P<0.05或P<0.01)。4 Beclin1蛋白Western blot检测结果:与Sham组比较,VD组各时间点的Beclin1蛋白表达均明显增高(P<0.05或P<0.01);与VD组比较,LY294002组和雷帕霉素组各时间点Beclin1表达明显增高(P<0.05或P<0.01)。5LC3蛋白Western blot检测结果:与Sham组比较,VD组各时间点的LC3II/LC3I比值均增高(P<0.05或P<0.01);与VD组比较,LY294002组和雷帕霉素组各时间点LC3II/LC3I比值增高,(P<0.05或P<0.01)。6 LC3蛋白荧光标记检测结果:荧光显微镜拍摄结果显示,Sham组4周时,神经元胞质内LC3呈散在低表达;VD组4周时神经元胞质内LC3表达明显增多;LY294002组和雷帕霉素组4周时神经元胞质内LC3表达增多,呈聚集状。结论1 PI3K、Akt和m TOR蛋白在VD大鼠海马CA1区神经细胞内高表达,PI3K/Akt/m TOR信号通路参与了血管性痴呆的发病过程。2 PI3K/Akt/m TOR信号通路在血管性痴呆诱导的自噬中起到了抑制作用。