戊型肝炎病毒ORF2基因分段克隆与序列分析

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戊型肝炎(Hepatitis E)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus HEV)引起的急性自限性疾病。其临床特征为通常表现是发热、全身疲乏、食欲不振、厌油腻、恶心呕吐、尿色深黄如浓茶、眼睛和皮肤发黄,肝功能检查出现转氨酶迅速升高到几百甚至几千单位,黄疸较常见,并可持续一周。在亚洲、非洲和美洲等发展中国家人群中发生比较普遍,在一些地区可占到急性病毒性肝炎的50%,是导致发病和病死的重要因素,尤其对孕妇可造成有20%的病死率。对人类健康具有严重危害性。HEV是一种无包膜的正义单链RNA病毒,目前归于嵌杯病毒科,直径为27-32nm,基因组全长大约为7.5kb,具有3个互相重叠的开放阅读框架即ORF1、ORF2和ORF3,并且5’-端有27个核苷酸的非编码区,3’-端为非结构区,ORF1长约5kb,它主要编码与HEV复制相关的非结构蛋白;ORF2长约2kb,编码病毒衣壳蛋白,为主要的结构基因编码区。ORF3含有369个核苷酸,编码产物为磷蛋白,与细胞的支架及HEV特异性免疫活性有关。不同地区来源的HEV基因序列有一定的差异,但是同一地区来源的HEV的基因序列保持相对稳定。随着HEV不断被分离,克隆和鉴定,根据各毒株核苷酸,氨基酸的同源性的大小以及系统进化树的分析,全球的HEV至少有8个基因型。我国主要为1和4型,而且散发性戊型肝炎中以4型为主。在发展中国家主要引起病毒性肝炎的戊型肝炎病毒(HEV),已经在北美和亚洲猪体内检测出,关于是否能在人畜之间传播引起了人们极大的关心。本研究对黑龙江省一株猪粪便中的HEV的部分特性进行研究,根据已知序列设计了5组兼并引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测猪粪便中的HEV RNA,分段的将PCR阳性产物的ORF2片断基因进行了克隆测序,并与已知人的HEV和猪的HEV进行了序列比较分析。结果该株序列ORF2区与已知人的1,2,3,4型HEV ORF2区的同源率为59.6%、56.8%、59.6%、74.4%。与美国猪和日本猪的HEV的同源率只用有57.7%。说明该株猪源的HEV与中国人戊型肝炎病毒基因IV型的关系比较近,但是有着较高的基因异质性,是一株比较独特的HEV株。综上所述,本实验对黑龙江省一株猪源的HEV病毒的部分特性进行研究,并对其ORF2区基因进行了克隆比较分析,对于更好地了解HEV变异性和流行病学特征有重要意义;同时,可以为寻找HEV共同抗原和通用性PCR引物,研制更加敏感、特异的HEV诊断试剂盒,研制行之有效的HEV基因工程疫苗及为HEV感染的预防和临床治疗提供资料。
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