传染性支气管炎（avian infectious bronchitis,IB）是由传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）引起的急性、高度接触性传染病。IBV容易发生变异,血清型/基因型众多,不同型毒株之间存在较大的抗原差异。对于新出现的基因型,现有疫苗往往不能提供全面保护。在针对新基因型的疫苗问世之前,采用现有不同基因型疫苗的组合可以提供更好的交叉免疫保护,此为“保护型”疫苗组合的概念。TWⅠ型IBV毒株自2009年传入中国大陆,随后迅速蔓延,目前该型毒株已经占到我国流行毒株总数的15%。为了有效防控TWⅠ型毒株的流行,本研究拟筛选针对TWⅠ型IBV的“保护型”疫苗组合,并研制针对该型毒株的弱毒疫苗。1.TWⅠ型IBV“保护型”疫苗组合的筛选本研究首先平行比较了单独接种QXL87、LDT3-A、4/91和Ma5等现有商品化弱毒疫苗对TWⅠ型IBV毒株的免疫保护效果。将120只1日龄的商品雏鸡均分为5组,其中4组于1日龄通过滴鼻点眼方式接种上述4种弱毒疫苗,接种剂量为1羽份/只鸡,另1组为非免疫攻毒组。14日龄时,通过滴鼻点眼的方式接种TW Ⅰ型IBV AH1103强毒株,每只鸡106.0EID50/0.1 mL。攻毒后每日观察鸡的临床症状;攻毒后第5天,剖检观察大体病变和组织病理学病变;攻毒后第6天,进行气管纤毛活力评价;攻毒后第5天和第9天,检测呼吸道和泄殖腔排毒情况。结果表明,QXL87弱毒疫苗可提供针对TW Ⅰ型毒株的部分临床保护;而LDT3-A、4/91和Ma5弱毒疫苗对TWⅠ型毒株的保护效果均不理想,攻毒后出现严重的临床症状,且呼吸道和泄殖腔排毒较为严重。以QXL87弱毒苗为基础,分别与LDT3-A、4/91和Ma5组合使用,评价各种疫苗组合对TWⅠ型IBV毒株的保护效果。将120只1日龄的商品鸡均分为5组,分别为 QXL87+LDT3-A 组、QXL87+4/91 组、QXL87+Ma5 组、QXL87 组和攻毒对照组。QXL87+LDT3-A组、QXL87+4/91组、QXL87+Ma5组接种剂量为每种疫苗1羽份/只鸡,QXL87组的接种剂量为2羽份/只鸡,接种方式均为滴鼻点眼。免疫接种后第14天,所有试验鸡通过滴鼻点眼的方式接种TW Ⅰ型AH1103强毒株,剂量为106.0EID50/0.1 mL。攻毒后每日观察鸡的临床症状,定期剖检和对气管纤毛活力进行评价,并采集口腔拭子和泄殖腔拭子进行排毒监测。结果表明,QXL87弱毒疫苗与其它血清型疫苗联合使用可以减轻TWⅠ型毒株攻毒后临床症状,降低气管和泄殖腔的排毒量。综合考虑临床症状、大体病变、气管纤毛活力、排毒量和病理损伤等评价指标,QXL87+4/91组对TW Ⅰ型毒株的免疫保护效果优于其他组。因此,QXL87与4/91的组合为TW Ⅰ型IBV毒株的“保护型”疫苗组合。2.TW Ⅰ型IBV疫苗的研制与评价本研究将TW Ⅰ型IBV AH1103株在SPF鸡胚上连续传代至160代次,挑取第5代毒株建立攻毒模型,并对120代、140代、160代毒株进行安全性和免疫原性评价。通过观察各代次毒株接种7日龄SPF雏鸡后的临床症状、气管纤毛损伤程度、各器官载毒量以及组织病变情况,我们发现5代毒株可引起雏鸡呼吸道症状,气管充血、出血,肾脏肿大、肾脏尿酸盐沉积,而120代、140代、160代毒株均无明显的致病性。分别对120代、140代、160代毒株的免疫原性进行评价,发现免疫组的鸡在受到TWⅠ型毒株攻击时均未出现临床症状、气管纤毛受保护程度高,且呼吸道和泄殖腔的排毒量显著低于非免疫攻毒组。上述结果表明,AH1103毒株经在SPF鸡胚上传代,致病力充分降低的同时,仍然保留良好的免疫原性,可望成为TW Ⅰ型IBV弱毒疫苗候选毒株。