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目的:探讨白藜芦醇在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化应激中的作用,白藜芦醇(resveratrol,Resv)可否通过调节p38 MAPK通路,增加细胞中自由基清除酶系的合成,从而降低细胞中活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的合成,下调PCSK9表达,继而抑制LPS诱导的HUVECs氧化损伤和细胞凋亡,最终实现其抗氧化的生理学功能。方法:离体培养HUVECs,用不同浓度(10,20,30,40,60,100)μg/mL LPS处理HUVECs 24h,MTT筛选LPS的最适作用浓度,构建HUVECs的氧化损伤模型;用不同浓度(5,10,20,30,40,60,100)μmol/L Resv预处理HUVECs 24 h,再用最适浓度的LPS处理24 h,MTT检测不同浓度白藜芦醇对LPS诱导的HUVECs的增殖情况;Hoechst 33342染色观察细胞核形态,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。试剂盒测定细胞中ROS的含量,检测细胞中自由基清除酶系CAT、GPX、SOD的活性;Western-blot检测细胞中PCSK9、p38 MAPK表达情况和磷酸化水平以及Bax、Bcl-2、Caspase-3和cleaved Caspase-3等凋亡相关蛋白表达情况。结果:1.MTT结果显示,当用浓度为10μg/mL LPS处理细胞24h时,与Control组相比,细胞活性没有明显变化,当用20、30、60、100μg/mL LPS处理细胞24 h时,细胞活性均明显降低,结果具有统计学差异(P<0.05),因此,选用20μg/mL LPS来构建HUVECs氧化损伤模型。接下来探讨白藜芦醇对HUVECs的保护作用,用不同浓度白藜芦醇预处理细胞24 h,再用20μg/mL LPS处理24 h,MTT结果显示,与LPS组相比,当白藜芦醇浓度为5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,30μmol/L时,细胞活性均增加,浓度为30μmol/L时,结果具有统计学差异(P<0.05),实验所选用的白藜芦醇浓度为:低:5μmol/L,中:20μmol/L,高:30μmol/L。2.Hoechst 33342染色观察细胞核形态,结果显示,与Control组相比,LPS组细胞核中出现染色体固缩,与LPS组相比,5μmol/L、20μmol/L、30μmol/L Resv组凋亡细胞数逐渐减少。3.Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,流式结果显示,与Control组相比,LPS组16.1%的细胞出现凋亡;5μmol/L、20μmol/L、30μmol/L Resv组细胞凋亡明显减少,分别为5.65%、5.27%、4.72%,结果均具有统计学差异(P<0.05)。表明LPS能诱导HUVECs凋亡,而Resv可减少细胞凋亡。4.检测细胞中自由基清除酶系CAT、GPX、SOD活性,结果显示,与Control组相比,LPS处理组可明显降低HUVECs中CAT、SOD、GPX活性(P<0.05);浓度为5μmol/L、20μmol/L、30μmol/L的白藜芦醇均可提高HUVECs中SOD、CAT、GPX活性,与LPS组相比,细胞中酶活性显著提高,结果均具有统计学差异(P<0.05)。细胞中ROS含量检测显示,与Control组相比,LPS组ROS含量明显增加;与LPS组相比,浓度为5μmol/L、20μmol/L、30μmol/L Resv组ROS含量均降低,其中20μmol/L、30μmol/L Resv组ROS降低最为显著,且结果具有统计学差异(P<0.05)。显示LPS能诱导HUVECs中ROS的产生,而Resv能通过提高细胞中自由基清除酶系的合成而降低细胞中ROS的合成。5.Western blot检测PCSK9蛋白表达,结果显示,与Control组相比,LPS组PCSK9表达明显增加,结果具有统计学差异(P<0.05);与LPS组相比,5μmol/L、20μmol/L Resv组PCSK9表达均有下降,但结果没有统计学差异,30μmol/L Resv组PCSK9蛋白明显下降,结果有统计学差异(P<0.05)。表明LPS能诱导HUVECs中PCSK9的表达,而Resv能降低细胞中PCSK9表达。6.Western blot检测p38 MAPK通路蛋白,结果显示,以p38MAPK蛋白表达为参照,与Control组相比,LPS组p-p38 MAPK蛋白表达明显增加,与LPS组相比,5μmol/L Resv组p-p38 MAPK蛋白表达虽有减少,但结果无统计学差异,20μmol/L、30μmol/L Resv组p-p38 MAPK蛋白表达明显减少,结果具有统计学差异(P<0.05)。表明LPS能诱导HUVECs中p-p38 MAPK表达,Resv可降低细胞中p-p38 MAPK表达。7.Western blot检测凋亡相关蛋白表达,结果显示,与Control组相比,LPS组caspase-3蛋白表达稍有增加,但结果无统计学差异;而cleaved caspase-3蛋白表达明显增加,结果有统计学差异(P<0.05);Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加,结果均具有统计学差异(P<0.05)。与LPS组相比,5μmol/L、20μmol/L Resv组Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增加,结果均有统计学差异(P<0.05);30μmol/L Resv组Bcl-2蛋白表达显著增加,cleaved caspase-3和Bax蛋白表达显著减少,结果均有统计学差异(P<0.05)。显示LPS能增加HUVECs中cleaved caspase-3、Bax表达,降低Bcl-2表达;而Resv可降低细胞中cleaved caspase-3、Bax的表达,提高凋亡抑制基因Bcl-2的表达。结论:白藜芦醇可通过抑制p38 MAPK通路,增加HUVECs细胞中抗氧化酶SOD、CAT、GSH-PX活性,减少ROS生成,减少PCSK9表达,并通过Bcl-2/Bax/cleaved caspase-3途径抑制细胞凋亡。