RAD21基因在宫颈癌组织中的表达及意义

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背景与目的宫颈癌是一种妇科最常见的恶性肿瘤,严重威胁着妇女的健康。与其它恶性肿瘤一样,对于其发病机制及药物治疗靶点的探索一直是近年来研究的热点,目前,已经有大量研究证明人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌的发生有关,然而,感染HPV的病人并不全部发展为宫颈癌,提示另有其他因素共同参与了宫颈癌的发生过程。RAD21基因是酵母粟酒RAD21 (S. Pombe RAD21)的人类同系物,其产物是一种与DNA双链断裂修复有关的核内蛋白质,研究表明,RAD21基因是保持姐妹染色单体结合并确保正确的复制染色体分离进入子细胞的保守的有丝分裂复合物的一个组分,在此过程中RAD21的缺失可以导致非整倍性。一些研究显示RAD21基因是乳腺癌的一个易感基因,具有癌基因的特点。目前,对于RAD21基因在宫颈癌组织中的表达情况国内外尚无相关的报道,本研究探讨RAD21基因在中国妇女宫颈癌组织中的表达,以此来探究RAD21基因与宫颈癌的发生发展及治疗之间的关系。材料与方法RAD21蛋白在宫颈癌中的表达:应用免疫组化SP法对105例存档石蜡切片进行检测。其中15例正常宫颈组织,65例宫颈癌,30例宫颈上皮内瘤变(CIN)。采用显色强度结合阳性细胞百分比法判读结果,以免疫积分作为半定量分析的依据,积分大于或等于3分者为阳性表达。实验数据采用SPSS16.0统计软件进行分析。各组间免疫积分利用单因素方差分析,阳性率各组间利用x2检验,检验水准a=0.05。采用RT-PCR方法检测10例正常宫颈和32例宫颈癌组织中RAD21基因mRNA的表达情况。以β-actin作为内参照基因。β-actin的引物序列为5ATCATGTTTGAGACCTTCAACA 3’和5’CATCTCTTGCTCGAAGTCCA 3’。RAD21基因异物序列为5’ACCTACCCACCTGTAAATGGGG 3’和5’TGAAGAAAGATACTCAGGCACAGA3’。PCR扩增35个循环。每个样品做两个平行,设两个空白对照。用凝胶图像分析系统(quantity-one分析软件)对PCR产物进行半定量分析,用所得产物的积分光密度与各自内参积分光密度的比值反映RAD21基因的mRNA水平。所得数据采用SPSS16.0统计软件进行分析。各组计量资料结果采用t检验,检验水准a=0.05结果正常宫颈组织的个别上皮细胞胞核中可见少量淡黄色颗粒。随着宫颈病变程度的加深,细胞核染色的强度和阳性细胞率均逐渐增加。宫颈癌组织肿瘤细胞的胞核中可见大量的黄色或棕黄色颗粒。RAD21蛋白在正常宫颈组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组和宫颈癌组免疫积分逐渐升高,CINⅠ组的免疫积分(2.10±1.16)显著高于正常宫颈组(0.51±0.60)差异有统计学意义,P<0.001;CINⅠ组和CINⅡ组的免疫积分比较无统计学意义,P=0.533;CINⅡ组和CINⅢ组间免疫积分比较有统计学意义,P<0.001;宫颈癌组的免疫积分(6.39±2.56)明显高于CINⅢ组的免疫积分(4.69±1.57),差异有统计学意义,P<0.001。RAD21蛋白在正常宫颈组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组和宫颈癌组的阳性表达率分别为6.60%、37.50%、40.00%、89.20%和98.46%,宫颈癌组与正常宫颈组、CINⅠ组和CINⅡ组间比较阳性表达率有显著差异(P<0.05),宫颈癌组和CINIII组间的阳性表达率无统计学差异,P=1.103宫颈癌组的RAD21 mRNA相对表达量为0.24±0.08,正常宫颈组织的RAD21mRNA相对表达量为0.08±0.06。两组间比较mRNA表达量存在显著差异(P<0.001)。结论RAD21蛋白及mRNA均在宫颈癌中呈高表达;随着宫颈病变级别的升高,RAD21蛋白的表达量增高;宫颈癌组织中RAD21基因mRNA呈显著高表达。RAD21可能在宫颈癌的发生发展中起着一定的作用。
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