哺乳动物肠上皮是一种拥有快速自我更新能力的组织,在维持机体免疫稳态与肠道应激后的损伤修复中发挥重要作用。源于隐窝底部的多能肠干细胞不断进行增殖、迁移与分化,并沿隐窝—绒毛轴向上移动,从而维持肠上皮完整性。本试验旨在阐明lncCHUKILA调控猪肠上皮细胞增殖的分子作用机制。本研究通过对课题组前期转录组学测序数据分析发现了新长非编码RNA CHUKILA,结合生信功能预测分析的结果,显示lnc-CHUKILA与CHUK（IKKα）之间存在某种潜在的调控关系作用于肠道免疫功能。通过过表达CHUK操作研究其对猪肠上皮细胞增殖的影响;利用RNA pull down与RIP技术研究与lnc-CHUKILA发生直接结合作用的蛋白;在猪的小肠上皮细胞中采用反义寡聚核苷酸技术敲减lnc-CHUKILA,Western blotting方法检测关键蛋白的表达变化,并应用CCK-8、Edu法与划痕试验测定lncCHUKILA对肠上皮细胞增殖及迁移能力的影响。得到的试验结果如下:1.在猪小肠上皮细胞系IPEC-J2中过表达CHUK后,细胞数和OD值均明显增加（P<0.05）,表明CHUK过表达促进了猪小肠上皮细胞的增殖。2.经测序数据分析发现的新长非编码RNA CHUKILA（登录号为MΚ515147）,其特征为不具有蛋白编码能力,细胞核中分布高于细胞质,在小肠组织中的表达极显著高于其他组织（P<0.01）。PCR扩增获得长为553 bp的lnc-CHUKILA部分序列。3.通过顺反式调控作用预测结果表明,lnc-CHUKILA具有参与机体的细胞增殖、应激反应、基因的转录调控与可变剪接等功能,推测其可通过ceRNA机制调控CHUK基因的表达,参与机体炎性反应和细胞增殖等过程。4.与对照组相比,RNA pull down实验组下拉到与lnc-CHUKILA结合的862个差异蛋白（48个同源组）,其中DDX41与lnc-CHUKILA间的相互作用在RIP试验中得到进一步的验证。5.敲减lnc-CHUKILA引起IPEC-J2细胞系中DDX41、IKKα、IKKβ、PCNA蛋白的表达水平均显著降低（P<0.05）。在细胞增殖测定与划痕试验中,lnc-CHUKILA的敲减极显著抑制了小肠上皮细胞的增殖与迁移能力（P<0.01）。综上所述,本研究发现并鉴定新长非编码RNA CHUKILA,成功构建了lnc-CHUKILA分子调控网络,获得了该lncRNA下游作用蛋白,初步证明在猪小肠上皮细胞系中,lncCHUKILA通过与DDX41相互作用,介导NF-kappaB信号通路的激活,进而调控小肠上皮细胞的增殖能力。该研究结果进一步丰富和完善了lncRNA对肠上皮稳态的分子调控网络,为肠粘膜损伤以及肠道炎症的治疗提供了理论指引。