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背景和目的: 半个世纪以来，肺癌发病率及死亡率呈逐年增长的趋势，肺癌细胞的侵袭和转移是患者治疗失败和死亡的主要原因。上皮-间质转化(EMT)是指上皮细胞通过与周围间质相互作用后，获得了某些间质细胞生物学特性的过程。microRNAs(miRNAs)长约20-25个核苷酸，是广泛存在于真核细胞中的非编码小RNA，与许多恶性肿瘤细胞侵袭和迁移的机制密切相关。研究表明，miR-188-5p在很多肿瘤中表现为抑癌基因的性质。本课题通过体外实验，研究miR-188-5p对肺癌95D细胞侵袭和转移的影响;检测上调miR-188-5p表达是否可影响95D细胞EMT相关指标的变化，探讨其调控机制。 研究方法: 1.以人高转移肺腺癌细胞95D为研究对象，利用常规细胞培养方法对细胞进行复苏、培养、传代和冻存。 2.将研究对象分为两组:采用脂质体Lipofectamin2000转染法将人工合成的miR-188-5p mimic（miR-188-5pmimic组）、无关序列(miR-188-5pNC组)分别瞬时转染至95D细胞。 3.通过划痕实验对划痕的空白区域边缘的细胞进行观察，测定划痕宽度，分析比较各组间细胞迁移情况。 4.通过Transwell小室侵袭实验模拟肿瘤细胞在生物体内侵袭过程，计数进入下室的细胞数，反映细胞转染后侵袭能力的变化。 5.应用实时定量PCR，将待测细胞提取总RNA纯化后进行RNA质量检验和纯度测定。样品检验合格后，利用SYBR GreenⅠ染料法进行PCR反应，检测各组95D细胞EMT的上皮细胞分子标记物E-cadherin及间质细胞分子标记物α-SMA的mRNA表达。 6.为了进一步验证实验，将转染后的各组待测细胞提取总蛋白后，应用BCA法测定蛋白浓度，利用蛋白免疫印迹方法进行E-cadherin、α-SMA蛋白表达检测。 结果: 1.miR-188-5p对人肺腺癌细胞95D迁移和侵袭的影响 划痕实验结果显示，转染miR-188-5p mimic组的95D细胞迁移能力较miR-188-5p NC组明显减弱，差异具有统计学意义(P＜0.05)。Transwell侵袭实验结果显示，转染miR-188-5pmimic组与miR-188-5p NC组相比细胞穿膜数目减少，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 2.各组95D细胞E-cadherin、α-SMA的mRNA和蛋白的表达 首先，实时定量PCR检测E-cadherin、α-SMA的mRNA的表达水平，与miR-188-5pNC组相比，miR-188-5p mimic转染组人肺癌95D细胞中的E-cadherin的mRNA表达水平显著提高，而α-SMA的mRNA表达水平降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。其次，Western Blot实验得出相同的结果(P＜0.05)，进一步验证了实验结果。 结论: 1.上调miR-188-5p的表达可以抑制肺癌95D细胞的迁移及侵袭。 2.上调miR-188-5p的表达可以抑制肺癌95D细胞的EMT过程。