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目的: 采用体外培养人牙髓细胞的方法建立实验模型,研究不同浓度葡萄糖对体外分离培养的人牙髓细胞钙化作用的影响。 方法: 1.牙髓细胞的分离培养和鉴定:采用改良组织块法,体外培养人牙髓原代细胞并常规传代,按SP试剂盒说明书用SABC法进行波形丝蛋白和角蛋白的免疫组化染色,于倒置显微镜下观察。 2.用MTT方法检测不同浓度葡萄糖(5.5、15、25、35、45mmol/L)作用于HDPCs1、3、5、7天后的增殖水平。 3.采用ALP试剂盒检测不同浓度葡萄糖(5.5、15、25、35、45mmol/L)作用于hDPCs1、3、5、7、14天后ALP活性的改变。 4.采用RT-PCR法不同浓度葡萄糖(5.5、15、25、35、45mmol/L)作用于hDPCs1、3、5、7、10天后OPN mRNA的表达情况。 5.采用酶联免疫吸附法检测不同浓度葡萄糖(5.5、15、25、35、45mmol/L)作用于hDPCs1、3、5、7天后OPN的分泌情况。 6.采用茜素红染色法检测不同浓度葡萄糖(5.5、15、25、35、45mmol/L)作用于hDPCs28d后钙化结节的形成情况。 结果: 1.分离培养的人牙髓细胞,抗波形蛋白阳性,抗角蛋白阴性,具有持续增殖能力; 2.浓度为15,25mmol/L葡萄糖作用于人牙髓细胞第3、5、7天促进细胞增殖;浓度为35mmol/L,45mmol/L葡萄糖对人牙髓细胞早期增殖无明显促进作用; 3.浓度为25mmol/L葡萄糖可以促进人牙髓细胞中骨桥蛋白mRNA的表达和骨桥蛋白的分泌,并提高碱性磷酸酶活性; 4.浓度为15和25mmol/L葡萄糖作用于人牙髓细胞均可促进其钙化结节的生成。 结论: 高糖对人牙髓细胞钙化作用有明显的影响,并和高糖的浓度密切相关。适宜浓度的高糖可以有效促进人牙髓细胞的生长与增殖,提高人牙髓细胞的碱性磷酸酶活性,同时可促进骨桥蛋白的分泌与表达。