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舌鳞状细胞癌(Tongue squamous cell carcimoma,TSCC)的特点为肿瘤浸润和早期颈淋巴转移,且转移率较高。目前,舌癌的治疗主要是以外科手术为主辅助放射治疗、化学药物治疗等方法相结合的综合序列治疗,但近30年来舌鳞状细胞癌患者的生存率并未得到显著提高,其主要原因是术后肿瘤复发和转移。迄今为止,舌癌的浸润、转移机制仍不明确。亲环素A (Cyclophilin A, CypA)具有肽基脯氨酰顺/反异构酶(Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase, PPIase)活性,能催化细胞内蛋白质的折叠、装配和运输,起分子伴侣的作用。研究表明CypA还是一种氧化应激诱导分泌生长因子,CypA可能通过其受体细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,CD147)促进肿瘤细胞增生,CypA-CD147的配体-受体效应与多种肿瘤的发生发展密切相关。然而,CypA-CD147的配体-受体效应在舌鳞状细胞癌发生发展中的作用及分子机制尚不明确。本研究旨在探讨CypA-CD147配体-受体在舌鳞状细胞癌发生发展中的作用及可能分子机制。第一部分HIF-1α、CypA、CD147、VEGF-A、VEGF-C在舌癌中表达及与临床病理因素之间关系的研究目的：探讨配体亲环素A和受体CD147及低氧诱导因子HIF-1α、血管内皮生长因子VEGF-A和VEGF-C在舌癌中的表达,分析各因子的相关性及其表达与舌癌临床病理因素之间的关系。方法：应用免疫组织化学检测HIF-1α、 CypA、 CD147、VEGF-A、VEGF-C在80例舌癌组织及15例正常对照标本中的表达,微血管密度用CD34标记内皮细胞后检测,统计学分析其表达与舌癌临床病理特征及预后之间的关系。结果：HIF-1α、CypA、CD147、VEGF-A、VEGF-C蛋白在舌癌中高表达,且显著高于正常黏膜(P<0.01),高表达的配体-受体CypA-CD147与HIF-1α、VEGF-A、VEGF-C密切相关,VEGF-A与VEGF-C也密切相关(P<0.01)。Kaplan-Meier分析显示高表达的HIF-1α、CypA、CD147、VEGF-C可预测舌癌患者预后(P<0.05),多因素风险比例模型分析显示HIF-1α可作为舌癌独立预后因子。结论：CypA-CD147的配体-受体效应可能与舌癌的发生、低氧、血管生成、转移及预后密切相关,可作为舌癌的潜在治疗靶标。第二部分环孢素A抑制CypA的PPIase活性促进顺铂诱导舌癌细胞凋亡的研究目的：CypA具有肽基脯氨酰顺/反异构酶活性,研究发现CypA在肿瘤耐药中具有重要作用。本实验拟探索抑制CypA的肽基脯氨酰顺/反异构酶活性对舌癌细胞耐药的影响及机制,并进一步探讨CypA基因作为舌癌耐药治疗新靶点的可能性。方法：免疫抑制剂环孢素A在细胞内作用于CypA,可抑制CypA的肽基脯氨酰顺/反异构酶活性,采用细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、流式细胞仪等检测抑制CypA活性对舌癌细胞Tca8113顺铂耐药的影响及机制。结果：环孢素A和顺铂结合可以显著降低舌癌细胞Tca8113生存率,且具有时间和浓度依耐性,凋亡蛋白caspase-3的活性增强,细胞核染色质出现明显浓缩、高凝聚,部分细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。抑制CypA活性能增强顺铂引起的p53、 caspase-3的表达,Bax/Bcl-2比值的增高。顺铂可以引起舌癌细胞CypA表达的增强。结论：环孢素A可以有效促进顺铂诱导舌癌细胞凋亡,可能具有逆转舌癌细胞顺铂耐药的作用,抑制CypA的活性可以上调凋亡相关蛋白的表达,表明抑制CypA的活性可能为解决舌癌耐药及靶向治疗提供新思路。第三部分CypA-CD147配体受体对舌癌细胞增殖、侵袭的作用及分子机制研究目的：CypA与肿瘤耐药相关并在舌癌细胞中高表达,本实验以环孢素A抑制CypA活性,进一步探索CypA在舌癌细胞增殖和侵袭中的分子机制。方法：采用细胞增殖、细胞迁移、细胞侵袭、Western等方法检测CypA在舌癌增殖和侵袭中的作用及相关信号通路。结果：环孢素A抑制CypA活性可以显著降低舌癌细胞CAL27和SCC4的生存率,实验组舌癌细胞的迁移率较对照组显著降低,呈浓度及时间依耐性(P<0.05)。实验组舌癌细胞CAL27和SCC4的侵袭性较对照组显著降低,呈浓度依耐性(P<0.05)。抑制CypA活性能增强TSC-1、Caspase-3蛋白的表达,引起p-p38、p-mTOR、p-S6、CD147、FGF-2、Bcl-2蛋白表达的降低。结论：环孢素A可以有效降低舌癌细胞的增殖、迁移及侵袭性,抑制CypA的活性可以抑制增殖和侵袭相关蛋白的表达,表明CypA在舌癌细胞增殖与侵袭过程中起到重要作用。第四部分黄连素通过抑制CD147通路促进舌癌细胞自噬及凋亡的研究目的：探索黄连素对CD147通路的调节,及诱导舌癌细胞凋亡及自噬的作用。方法：采用MTT法,MDC荧光染色、AO荧光染色、Hoechst33258染色、Rhodamine123染色等检测黄连素对舌癌细胞凋亡及自噬的影响,并通过Western Blot印迹法检测CD147通路及凋亡、自噬相关蛋白的表达。结果：黄连素处理细胞后,细胞凋亡和自噬率均明显增加,3-MA可以抑制舌癌细胞的自噬而降低舌癌细胞凋亡,黄连素可以下调CD147的表达,而调高Beclin1的表达。结论：黄连素可以诱导舌癌细胞凋亡及自噬,其作用机制可能与CD147通路有关。