第一部分胺碘酮对替格瑞洛在大鼠体内药动学的影响目的:研究替格瑞洛在大鼠体内药动学及胺碘酮对其代谢的影响。方法:色谱柱:Diamonsil C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);检测器:AB SCIEX API 4000+检测器;柱温:30℃;流动相:乙腈-10 m M醋酸铵水溶液(甲酸调p H 3.14)(80:20,V/V);流速:1.0 m L/min;进样量:10μL;内标:布洛芬。将大鼠随机分为实验组和对照组,每组8只,实验组第1天给予胺碘酮负荷剂量60 mg/kg,第2到6天给予维持剂量20 mg/kg,每日2次;替格瑞洛第1天给予负荷剂量18 mg/kg,第2到6天给予维持剂量9 mg/kg,每日2次。第7天给予维持剂量胺碘酮和替格瑞洛维持剂量一次,并于给药后不同时间点取血,分离血浆,冷冻保存。对照组第1天灌胃替格瑞洛负荷剂量18 mg/kg,第2到6天给予替格瑞洛维持剂量9 mg/kg,每日2次,每天灌胃蒸馏水(与实验组胺碘酮等体积),每天2次,第7天给予维持剂量替格瑞洛一次,并于给药后不同时间点取血,分离血浆,冷冻保存。血浆样品处理后用LC-MS/MS测定,采用DAS 2.1.1药动学软件拟合药动学参数,并用SPSS 13.1统计学软件对两组大鼠的药动学参数进行比较。结果:方法学部分:标准曲线为Y=0.0075X-0.0530(线性范围:10.0~500.0 ng/m L,r=0.9982)。最低定量限为10.0 ng/m L。低、中、高浓度替格瑞洛的绝对回收率分别为(93.43±1.14)%、(92.27±2.56)%、(93.61±2.43)%,其RSD值分别为1.2%、2.8%、2.6%。内标布洛芬的绝对回收率为(91.38±1.60)%。其RSD值为1.7%。低、中、高浓度替格瑞洛的相对回收率分别为(101.65±0.09)%、(94.46±1.34)%、(92.77±0.05)%,其RSD值分别为9.0%、1.4%、4.9%。日内及日间精密度RSD均小于10%。室温放置24 h、-40℃保存5天对测定无影响,反复冻融3次性质稳定。对照组和实验组主要药动学参数如下:AUC0-36 h分别为(2637.29±1059.26)mg·h·L-1和(3806.35±1604.03)mg·h·L-1;AUC0-∞分别为(2913.53±1319.84)mg·h·L-1和(4478.14±2054.48)mg·h·L-1;t1/2分别为(8.24±5.30)h和(11.23±5.79)h;Tmax分别为(1.19±0.26)h和(1.31±0.37)h;CL分别为(3.54±1.21)L·h-1·kg-1和(2.45±1.12)L·h-1·kg-1;V分别为(44.02±22.17)L·kg-1和(35.98±18.85)L·kg-1;Cmax分别为(203.13±84.59)mg·L-1和(316.88±95.93)μg·L-1。与对照组相比实验组的Cmax有显著性差异(P<0.05),AUC0-36 h、AUC(0-∞)、CL、V、t1/2、Tmax与对照组相比没有显著性差异(P>0.05)结论:本实验建立了测定大鼠血浆中替格瑞洛浓度的LC-MS/MS法,该方法操作简便、灵敏度高、重现性好,可满足药动学研究。研究结果表明,合用胺碘酮后,替格瑞洛有代谢减慢、清除速度降低、药时曲线下面积增大的趋势。第二部分胺碘酮对替格瑞洛在大鼠体内药效学的影响目的:考察大鼠体内胺碘酮对替格瑞洛血小板聚集抑制率的影响。方法:大鼠眼内眦取血3m L,3.8%枸橼酸钠溶液抗凝(全血:抗凝剂=4:1),700 r/min离心10 min,取上清部分即富血小板血浆(PRP),剩余部分3000 r/min离心3min,取上清部分即贫血小板血浆(PPP)。PRP中血小板计数为4.0X l0/mm=I左右。按照Bom氏比浊法,将盛有225μLPRP及1小磁珠的比浊管置于血小板聚集仪中,经PPP标定后,加入诱导剂ADP 50μL诱导聚集[8]。所用ADP的终浓度为5μg/m L,测得联合用药前后5min内血小板的最大聚集率,按照血小板聚集抑制率=(未给药血小板聚集率-给药后血小板聚集率)/给药前血小板聚集率×100%,计算大鼠体内血小板聚集抑制率。通过对比联合用药替格瑞洛大鼠体内血小板聚集率抑制率的变化,得出大鼠体内合用胺碘酮对替格瑞洛药效学影响。将健康雄性SD大鼠16只,清洁级,随机分为对照组、实验组,给药前进行眼内眦取血。对照组1~14天单独给予替格瑞洛,实验组1~14天采用替格瑞洛、胺碘酮联合用药,分别于7、14 d给药后1.5 h取血。结果:胺碘酮与替格瑞洛联合用药时血小板聚集抑制率无显著性差异。结论:合用胺碘酮前后,替格瑞洛在大鼠体内的血小板聚集抑制率无显著性差异,胺碘酮对替格瑞洛在大鼠体内药效学无影响。