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目的:酶解辅助肉苁蓉提取前期结果表明,该方法可以显著提高肉苁蓉中苯乙醇苷及多糖的传质,因此,在此基础上研究肉苁蓉的酶解提取物对HKC细胞及慢性肾衰竭大鼠的影响,以便为肉苁蓉酶解辅助提取提供理论依据。方法:肉苁蓉酶解提取部分,通过对单因素考察以及工艺参数优选等实验来确定肉苁蓉酶解提取的最佳工艺参数。细胞实验部分,对人正常胚肾上皮细胞株HKC细胞进行体外培养,采用细胞增殖毒性实验探讨HKC细胞经阿霉素(Doxourbicin)损伤后,不同浓度肉苁蓉酶提液的正丁醇萃取物分别在24 h、48 h、72 h对其存活率的影响。采用Hoechst 33258染色法观察HKC经阿霉素损伤后,用不同浓度肉苁蓉酶提液的正丁醇萃取物处理24 h后HKC细胞的形态学变化。应用流式细胞技术检测不同浓度肉苁蓉酶提液的正丁醇萃取物作用24 h后对经阿霉素损伤的HKC细胞周期分布的影响。动物实验部分,大鼠通过腺嘌呤灌胃给药造慢性肾衰竭动物模型,造模成功后的大鼠分组给予相应的治疗药物,治疗28天后,对大鼠进行血清生化指标检测和血常规检测,并观察大鼠一般情况和肾脏组织改变。结果:肉苁蓉酶解辅助提取部分,实验最终确定的肉苁蓉酶解提取的最佳工艺参数为料液比1:8,酶解温度55℃,酶解时间2.5 h,纤维素酶的用量0.1%,肉苁蓉酶解辅助提取比传统水提法苯乙醇苷含量增加了64%。细胞实验部分,MTT结果表明,不同浓度肉苁蓉酶提液的正丁醇萃取物均对阿霉素损伤后的HKC细胞有明显的增殖作用,即细胞的存活率升高,并且作用强度与药物的浓度有明显的依赖性关系。染色结果表明,不同浓度肉苁蓉酶提液的正丁醇萃取物处理阿霉素损伤的HKC细胞24 h后,细胞凋现象亡明显减少,细胞形态趋于正常细胞,且与药物浓度有明显的依赖性。流式细胞技术测细胞周期结果表明,肉苁蓉酶提液的正丁醇萃取物影响阿霉素损伤后的HKC细胞周期的分布,随着肉苁蓉酶提液的正丁醇萃取物浓度的增加,G0/G1期细胞百分比逐渐升高,而G2/M期百分比逐渐降低,且细胞凋亡明显减少。动物实验部分,与模型对照组相比,肉苁蓉煎剂治疗组和正丁醇萃取治疗组的大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平明显降低,白蛋白(ALB)水平明显升高,红细胞数(RBC)、血红蛋白(HGB)、细胞压积(HCT)水平明显升高,大鼠肾脏指数减小,病理检查出现明显异常,水层治疗组基本没有变化。结论:酶解提取能够显著的提高肉苁蓉中有效成分苯乙醇苷的传质,而通过细胞实验和动物实验,说明肉苁蓉对慢性肾衰衰竭有一定的治疗作用,且其起主要治疗作用的是正丁醇萃取的有效部位。