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肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是世界范围内致死率排名第二的恶性肿瘤。HCC起病隐匿,发现时多已处于中晚期,虽然手术切除是肝癌最有效的治疗方法,但很多患者发现时已经丧失手术机会。目前临床上对肝癌的化疗效果有限,且肝癌患者对化疗药容易产生耐药。因此,近年来寻找肝癌的特异性标志物并探索针对肝癌的分子靶向治疗成为研究热点。STMN1是近年来研究较多的一种小分子蛋白,分子量为19kDa,在大部分正常组织中都有表达,在多种肿瘤组织中过表达。它能够在细胞有丝分裂和分裂间期改变微管动力学,参与细胞的增殖、运动及周期调控等过程。STMN1有望成为恶性肿瘤诊断和治疗的新靶点。目前,关于STMN1与恶性肿瘤之间的各种研究正在积极展开,但STMN1与肝细胞癌之间的关系的研究较少。因此,本课题将从以下两个方面研究STMN1与肝细胞癌之间的关系:1.分别应用免疫组织化学法(IHC)和免疫印迹法(Western Blot)检测STMN1在肝细胞癌组织及癌旁组织中的表达情况,并分析STMN1在肝细胞癌中的表达与患者临床特征及预后之间的关系。2.利用小干扰RNA(siRNA)沉默STMN1基因在肝癌细胞HepG2中的表达,Western Blot法检验siRNA对STMN1的沉默效率,MTT法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,在细胞水平研究STMN1与肝细胞癌之间的关系。第一部分 STMN1在肝细胞癌中的表达及临床意义目的分别应用免疫组织化学法(IHC)和免疫印迹法(Western Blot)检测STMN1在肝细胞癌组织和对应癌旁组织中的表达情况,并分析STMN1在肝细胞癌组织中的表达与患者临床特征及预后之间的关系。方法1.应用Western Blot方法检测20例肝细胞癌组织及对应癌旁组织新鲜标本中STMN1的表达情况。2.应用免疫组织化学法检测90例肝细胞癌组织和对应癌旁组织石蜡标本中STMN1的表达情况。3.分析比较STMN1在肝细胞癌组织和癌旁组织中的表达情况,探讨STMN1的表达与HCC患者临床特征之间的关系。4.生存分析探讨STMN1的表达与HCC患者预后之间的关系。结果1.Western Blot法和免疫组化法检测结果均表明STMN1在肝细胞癌组织中的表达程度较癌旁组织明显增高(P<0.05)。2.临床特征的统计分析发现,STMN1在HCC中的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小无关(P>0.05),与TNM分期和分化程度相关(P<0.05)。3.STMN1在肝细胞癌组织中的表达与患者无瘤生存时间及总生存时间存在负相关(P<0.05)。结论1.STMN1在肝细胞癌组织中表达较癌旁组织明显增高。2.STMN1的表达与HCC患者的年龄、性别、肿瘤大小无关,与TNM分期和分化程度相关,与患者无瘤生存时间及总生存期存在负相关。3.STMN1高表达可能与肝细胞癌的发生发展及预后有着重要影响。第二部分沉默STMN1的表达对肝癌细胞HepG2增殖凋亡的影响目的应用小干扰RNA(siRNA)沉默STMN1在肝癌细胞HepG2中的表达,并观察STMN1低表达对细胞增殖及凋亡的的影响。方法1.应用靶向STMN1的siRNA及针对无关序列的siRNA分别瞬时转染HepG2细胞,Western Bolt法检测转染后细胞中STMN1的表达情况。2.MTT法检测转染后细胞的细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法在流式细胞仪上检测转染后细胞的凋亡率。结果1.靶向STMN1的小干扰RNA(STMN1-siRNA)转染后HepG2细胞中STMN1的表达程度明显降低(P<0.05)。2.靶向STMN1的小干扰RNA(STMN1-siRNA)转染HepG2细胞后,细胞活力较对照组明显降低(P<0.05),细胞凋亡率较对照组明显增加(P<0.05)。结论1.靶向STMN1的小干扰RNA转染后可显著降低HepG2细胞中STMN1的表达。2.靶向STMN1的小干扰RNA转染HepG2细胞后,细胞活力明显降低,凋亡率明显增加,STMN1可以影响肝癌细胞的生物学功能。