荧光漂白恢复测定巨噬细胞Fc受体的流动性

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本文第一章对单个生物分子的检测特别是用光学方法检测(?)个生物分子进行了详细的综述。此部分包括单分子检测的意义、单分子检测技术、光学操纵术、单分子光学检测的常用方法、荧光探针的性质及标记方法、单分子的荧光特点及单分子的证明、单分子检测的技术关键、单分子检测的内容及发展现状等内容。对当今在单分子研究领域应用较广的激光扫描共聚焦(CLSFM)、全内反射(TIRFM)等显微术的原理及仪器结构,光镊、膜片钳、玻璃微针等微操作术的原理及应用,荧光共振能量转移(FRET)、荧光漂白后恢复(FRAP)等检测技术的原理及应用,绿荧光蛋白(GFP)、藻胆蛋白(PE)、量子点(QD)等新型荧光探针的荧光特性、标记方法作了较为细致的介绍,总结了单分子检测在分子马达、细胞信号传导、DNA动力学、单分子荧光动力学、单分子酶学、蛋白质动力学、跨膜运输及离子通道等诸方面的应用及发展现状,本章共引用文献146篇。 第二章中我们用荧光漂白后恢复的方法研究了小鼠巨噬细胞膜表面Fc受体的荧光恢复率和运动分数。从小鼠的腹水中提取巨噬细胞,用Alexa 488标记的goat anti-rat IgG在37℃下进行孵育。我们对溶液的处理、调理素的浓度、孵育时间进行了讨论,发现Alexa 488标记的goat anti-rat IgG的浓度为4×10-6g/mL、孵育时间为30min时,孵育效果较好。用CLSFM对孵育后的巨噬细胞进行扫描,发现巨噬细胞膜表面的Fc受体的分布是不均匀的。利用荧光漂白后恢复的方法,分别设定漂白激光强度、扫描激光强度、漂白时间和漂白后恢复时间,对巨噬细胞的局部区域漂白前后的荧光强度变化作了分析,检测了Fc受体的荧光恢复率,计算了Fc受体的运动分数(mobile fraction,Mf)。 第三章中我们用双荧光标记法,用4×10-6g/mL Alexa 488标记的goat anti-rat IgG作为调理素,调理酵母菌,探讨了Alexa 488标记的goat anti-rat IgG作为调理素的可行性,并对巨噬细胞的噬菌率进行了检测。
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