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白藜芦醇(Resveratrol,Res)是植物分泌的一种抗毒素,具有广泛的药理和生物活性。研究表明,白藜芦醇可促进卵母细胞体外成熟和胚胎体外发育,但对其作用机制尚未清楚,特别是对Res在胚胎发育阻滞中的作用机制还未见报道。本研究拟通过,探讨白藜芦醇对昆白小鼠早期胚胎发育和合子基因组激活(ZGA)的影响,以便深入了解胚胎发育阻滞与活性氧之间的关系,为认识胚胎的早期发生机理奠定基础。具体研究结果如下。1、探讨了白藜芦醇对小鼠早期胚胎体外发育的影响。为筛选得到白藜芦醇对小鼠胚胎处理的适宜作用浓度及作用时间,添加不同浓度Res到体外培养的小鼠胚胎培养液中,观察其作用效果。结果发现,2μmol/L处理组的4-细胞发育率(68.75%)、囊胚发育率(49.22%)和囊胚细胞数(51.40)显著高于对照组(58.29%、41.21%和44.27,p<0.05),4μmol/L组和5μmol/L组的4-细胞发育率(64.17%和61.83%)和囊胚发育率(45%和42.62%)与对照组无显著差异(p>0.05),但10μmol/L组的4-细胞率和囊胚率(36.52%,18.26%)显著低于对照组(p<0.05)。囊胚细胞凋亡数、凋亡相关基因和发育相关基因表达的分析结果发现,添加2μmol/L的Res可显著上调Bcl-2及Oct4、dx2和Nanog基因表达(p<0.05),显著下调Bax、p53基因表达(p<0.05),但对Casepase3基因表达和囊胚细胞凋亡数(1.14 vs 1.57)没有影响(p>0.05)。不同时间段添加Res的试验结果发现,Res发挥作用时间主要是在胚胎培养的第二天,即2-细胞至4-细胞阶段。2、分析了Res对体外培养小鼠胚胎活性氧水平的影响。不同阶段小鼠胚胎的ROS水平检测结果发现,2μmol/L和4 μmol/L Res组的2-细胞、4-细胞胚胎和囊胚ROS水平对对照组无显著差异(26.84 vs 26.00,25.8: 33.56 vs 32.79,30.71；15.79 vs 17.10,17.55,p>0.05),体内发育的2-细胞、4-细胞期胚胎活性氧水平显著高于体外培养对照组(39.62 vx 26.00,44.53vs 32.79,p<0.05)。为进一步了解Res的抗氧化作用,检测了抗氧化相关基因GPX1、Mn-SOD、PRDX3、GLS2表达,并进行了低氧培养试验。结果发现,添加2μmol/L 和4 μmol/L Res能显著提高以上基因的表达,在低氧培养条件(5%02)下Res不能提高胚胎的囊胚率(41.07% vs39.07%,p>0.05)3、初步研究了Res促进小鼠胚胎越过2-细胞阻滞的作用机制。qRT-PCR法检测合子基因组激活(ZGA)相关基因表达情况的结果发现,2μmol/L的Res可显著提高2-细胞至4-细胞胚胎Hsp70.1.Zscan4d. MuERV、TRC、ND-1、ATP6、ATP8及Oct4基因表达(p<0.05)和胚胎的膜电位(p<0.05)显著降低Sox2基因表达(p<0.05),但不影响2-细胞期胚胎线粒体的分布。同一处理组胚胎中4-细胞期的膜电位显著高于2-细胞期(p<0.05)以上.结果表明,在M16培养液中添加2μmol/L Res可显著提高体外培养小鼠囊胚发育率及其质量。Res可能主要作用于2-细胞至4-细胞阶段,通过提高ATP合酶表达,促进线粒体氧化磷酸化水平,或通过影响母源转录因子Oct4、Sox2的表达,促进ZGA的发生,从而提高体外培养小鼠囊胚率及其质量,可能与抗氧化途径关系不大。