【摘 要】
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细胞的正常有氧代谢过程会产生活性氧类物质(Reactive Oxygen Species,ROS),当细胞的抗氧防线被攻破后,氧化应激产生,细胞由还原态变为氧化态。为了防止活性氧引起的氧化损伤
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细胞的正常有氧代谢过程会产生活性氧类物质(Reactive Oxygen Species,ROS),当细胞的抗氧防线被攻破后,氧化应激产生,细胞由还原态变为氧化态。为了防止活性氧引起的氧化损伤和维持细胞稳态,在长期进化过程中微生物形成了抗氧化防御系统来感知、保护和调控有机氧化剂毒性和ROS造成的氧化损伤,这些防御体系包括非酶类体系和酶类。其中非酶类抗氧化主要包括低分子量物质,如维生素C和E及小分子硫醇(LMW)如谷胱甘肽、分枝硫醇等。酶类主要是指谷氧还原蛋白(Gpx)、超氧化物歧化酶(SOD),硫氧还原蛋白(Trx)等。各种酶可协同作用直接清除ROS和修复氧化损伤。Ohr蛋白是ohr基因(Organic Hydroperoxide Resistance gene)编码的一个有机抗氧化蛋白,它能够有效清除细胞体内ROS,对于生物的生存至关重要。本研究发现,谷氨酸棒状杆菌中的Ohr蛋白对有机氧化剂的分解能力高于对无机氧化剂的分解并发现Ohr功能的发挥依赖于半胱氨酸残基和硫醇。它以Lpd/SucB和LpdA还原系统作为主要的电子供体,经典的Trx/TrxR系统也能微弱的起作用。谷氨酸棒状杆菌中的另一个经典的MSH/Mrx/Mtr系统却不能。Ohr蛋白能够高效的分解有机氧化剂如CHP,但是对于无机氧化剂如H2O2却效率较低,Ohr分解有机氧化剂的效率是分解无机氧化剂效率的至少10000倍。所有的Ohr同源基因都含有两个保守的结构域,每个结构域里面都有两个半胱氨酸残基,其中一个位于所有过氧化物还原蛋白家族都含有的VCP标签内。在突变了其中任意一个半胱氨酸残基后,Ohr的活性都急剧的下降。敲除ohr基因会引起Δohr突变体抗性的降低,在有机氧化剂CHP处理后存活率大量下降,体内的ROS水平显著上升,造成了大量蛋白的羰基化。相反,在无机氧化剂H2O2处理后,存活率也下降,但是相比有机氧化剂而言幅度较小,此外体内ROS的水平也有一定量的上升,但是只产生了极少量的蛋白羰基化。综上所述,Ohr对于谷氨酸棒状杆菌抵抗有机氧化剂非常重要。
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