背景及目的近年来,甲状腺癌的发病率呈现逐年上升的趋势,而且作为高发性内分泌系统最常见的肿瘤,越来越引起人们的关注。甲状腺癌的主要病理类型包括:分化型甲状腺癌、未分化甲状腺癌和来源于滤泡旁C细胞的甲状腺髓样癌,分化型甲状腺癌又由甲状腺乳头状癌、滤泡状甲状腺癌组成。其中,分化型甲状腺癌占所有甲状腺癌的90%以上,是一种常见的、多样化的内分泌恶性肿瘤。研究发现大多数分化型甲状腺癌的患者存在着一定可治愈性,但是复发率相对较高,大约在10%~30%,而且5%的患者对常规的治疗是无法治愈的,所以我们需要找到有效治疗此类患者的方法。在过去的20年里,甲状腺癌分子生物学取得显著进展,大量的甲状腺癌发生、发展相关突变基因被发现。因此,我们需要进一步了解这些基因在甲状腺癌中的作用机制以及与临床的相关性,为分化型甲状腺癌的治疗奠定基础,并将这些知识从理论转移到临床决策中去。最近一项研究表明位于11号染色长臂体上的CCDC67基因是一个新的候选抑癌基因,而且发现其在胃癌、乳腺癌等恶性肿瘤中表达缺失或降低,但是其在甲状腺癌中的研究却鲜有报道。因此,本实验首先在细胞学水平,通过实时荧光定量PCR技术对分化型甲状腺癌细胞株中CCDC67mRNA的表达情况进行分析;然后通过细胞免疫荧光技术检测CCDC67蛋白在分化型甲状腺癌中的表达分布情况。接着,收集临床甲状腺癌组织学标本,通过免疫组化技术检测CCDC67基因在临床甲状腺癌患者中的表达情况,并结合临床病理特征分析其相关性。最后,进一步探索CCDC67基因在甲状腺肿瘤中的分子作用机制,提取将标本中的DNA,通过DNA测序技术检测CCDC67与甲状腺癌经典基因BREAF V600E的相关性,接着用慢病毒转染甲状腺乳头状癌细胞,使得细胞中的CCDC67过表达,并分析转染前后甲状腺乳头状癌中凋亡相关因子的表达情况。这些为判定CCDC67基因在甲状腺肿瘤中的作用,其是否可以作为甲状腺癌的抑癌基因,以及基因学靶向治疗等方面奠定了一定的理论依据。材料与方法1、采用实时荧光定量PCR检测分化型甲状腺癌细胞株(TCP-1、FTC-133)CCDC67mRNA的表达情况,与正常甲状腺细胞株(Nthy-ori 3-1)进行比较。2、细胞免疫荧光技术检测分化型甲状腺癌细胞株(TCP-1、FTC-133)CCDC67蛋白的表达及分布情况,与正常甲状腺细胞株(Nthy-ori 3-1)进行比较。3、收集临床60例临床甲状腺癌组织学标本。通过免疫组化技术检测CCDC67基因在临床甲状腺癌患者的手术组织切片中的表达情况,并分析其与临床病理的相关性。4、提取组织标本中的DNA,通过DNA测序技术检测CCDC67基因与甲状腺癌经典基因BREAF V600E的相关性。5、构建CCDC67过表达的TPC-1细胞,通过RT-PCR技术检测转染前后凋亡相关因子Bcl-2、Bax的变化。6、采用SPSS21.0统计学软件对实验中的数据进行统计分析,其中两样本率的比较采用卡方检验,用单因素方差分析对多样本进行比较,用t检验对两组定量资料进行比较,以P<0.05为彼此差异有统计学意义。结果1、与正常甲状腺细胞株(Nthy-ori 3-1)相比,在分化型甲状腺癌细胞株中(TPC-1、FTC-133)CCDC67 mRNA表达明显降低,P<0.05。2、与正常甲状腺细胞株(Nthy-ori 3-1)相比,在分化型甲状腺癌细胞株中(TPC-1、FTC-133)CCDC67蛋白表达明显降低,P<0.05,CCDC67蛋白分布在细胞质和细胞核。3、60例癌旁正常甲状腺组织中均出现CCDC67蛋白的表达,PTC组织中52%(31/60)出现CCDC67蛋白的表达缺失,CCDC67蛋白表达的缺失情况与患者的TNM分期、组织病理分级以及淋巴结是否转移有关(P<0.05)4、CCDC67的低表达与BRAF突变正相关,r=0.707,P<0.05。5、慢病毒转染TPC-1细胞获得CCDC67高表达,使得Bcl-2 mRNA表达降低,Bax mRNA表达升高,P<0.05。结论CCDC67基因在甲状腺乳头状癌中表达缺失,缺失表达CCDC67的患者与其TNM分期、病理分级以及淋巴结转移有关,而且与经典BRAF基因突变正相关,通过慢病毒转染TPC-1获得高表达的CCDC67后,使得TPC-1恶性表型受到逆转,促进了TPC-1细胞凋亡的形成,证实了CCDC67基因作为甲状腺乳头状癌的一个抑癌基因。