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HSP70和HSP90在细胞内许多信号转导途径中起到十分重要的作用。研究表明在细胞应激时,HSP70或HSP90与蛋白激酶B(PKB)的结合对PKB的活性调节有至关重要的影响,但HSP70和HSP90与PKB之间如何发生相互作用的分子机制仍不清楚。我们给予瞬时转染PKB的HEK293T细胞短暂热休克刺激,以PKB为诱饵蛋白运用PULL-DOWN技术检测HSP90和/或HSP70与PKB的相互作用,并采用格尔德霉素(HSP90特异性抑制剂)处理上述细胞。结果发现:HSP90和HSP70均与PKB发生相互作用,当格尔德霉素抑制HSP90与PKB的结合时,PKB与HSP70的相互作用显著增强。由此我们推测:在HSP90被抑制的细胞内,细胞应激反应(如热休克)可由HSP70与PKB的结合量增加而发生补偿。但反之如果将HSP70与PKB的结合抑制后,PKB与HSP90的结合是否同样可发生补偿效应值得我们进一步研究。由于目前缺乏理想的HSP70特异性抑制剂,我们将HSP70基因中的蛋白结合域(PBD)缺失,构建HSP70的两种缺失突变体,其中一种只含HSP70的ATP域,另一种含HSP70-ATP域和CT域,使其失去与蛋白激酶B结合的功能。经双酶切及DNA测序鉴定后,两种真核表达重组体均成功构建,分别命名为truncated-ATP、truncated-ATP-CT。我们将这两种真核表达重组体瞬时转染HEK293T细胞,实验分组为:(1)未转染组;(2)全长HSP70转染组;(3)truncated-ATP转染组;(4)truncated-ATP-CT转染组。WESTERN-BLOT检测各组HSP70表达水平,结果表明:我们所构建的这两种重组体均在HEK293T细胞内成功表达。这将为后期进一步阐明HSP70/HSP90与PKB的相互作用的分子机制奠定实验基础。