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过渡金属配合物和稀土金属配合物催化DNA、RNA的断裂反应研究是近年来最为活跃的前沿研究领域之一,研究发现某些金属配合物具有核酸酶催化DNA、RNA断裂的功能,因而该研究对新型抗肿瘤、抗艾滋病化学药物的设计及其基因治疗乃至分子生物学研究中DNA、RNA的高度专一性定点断裂、染色体图谱分析及DNA定位诱变、基因工程中足迹技术以及DNA构象识别等方面均具有重要意义和应用前景。
为了研究和探讨金属配合物与DNA的作用机制及对DNA的断裂,我们通过分子设计,在6,6’-二甲基-2,2-联吡啶的基础上通过改变配体的取代基团设计合成了三种不同的配体,研究了它们的金属配合物与DNA的作用方式和断裂作用。本文内容主要包括以下方面:
1.设计合成了下列三种配体,6,6’-二[二(2-吡啶基)胺甲基]-2,2’-联吡啶(L1),6,6’-二[二(2-吡啶甲基)胺甲基]-2,2’-联吡啶(L2),6,6’-二(三乙胺甲基)-2,2-联吡啶二溴(L3),通过元素分析、质谱和核磁共振技术对配体进行了表征,所有表征均表明合成的就是我们的目标产物。
2.通过紫外可见光谱仪在pH=7.0的条件下测定DNA在有配合物存在时在190~330nm范围内的吸收光谱的变化,从而计算出DNA的解旋温度来比较配合物对DNA的作用强度,我们得到的结果是三个配合物与DNA作用的强弱:L3铜(Ⅱ)配合物>L1铜(Ⅱ)配合物>L2铜(Ⅱ)配合物。
3.通过荧光光谱仪测定DNA—EB体系在L2的铜配合物存在下的荧光光谱强度变化,发现由于配合物的竞争键合DNA导致了溴化乙锭(EB)分子从插入到的DNA分子中被取代出来,溴化乙锭的荧光被溶剂分子所猝灭。
4.通过琼脂糖凝胶电泳技术研究了上述配体的铜(Ⅱ)配合物以及镧(Ⅲ)配合物对超螺旋pBR322DNA的切割,结果发现L2的镧(Ⅲ)配合物能高效地断裂DNA双链,并对其进行了进一步的动力学研究。