【摘 要】
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目的:观察静注人免疫球蛋白（Intravenous immunoglobulin,IVIG）及唾液酸化静注人免疫球蛋白（S-IVIG）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠小胶质细胞系BV-2氧化应激与炎症的影响,验证IVIG的抗炎、抗氧化应激活性是否与其唾液酸化程度有关。方法:CCK-8法观察不同浓度IVIG及S-IVIG分别单独作用于BV-2小胶质细胞时对其活性的影响
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目的:观察静注人免疫球蛋白（Intravenous immunoglobulin,IVIG）及唾液酸化静注人免疫球蛋白（S-IVIG）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠小胶质细胞系BV-2氧化应激与炎症的影响,验证IVIG的抗炎、抗氧化应激活性是否与其唾液酸化程度有关。方法:CCK-8法观察不同浓度IVIG及S-IVIG分别单独作用于BV-2小胶质细胞时对其活性的影响;应用1.0μg/m L LPS作用于BV-2小胶质细胞24h建立中枢神经系统氧化应激与炎症反应模型,不同浓度IVIG及S-IVIG作用于LPS诱导的BV-2细胞,结果提示IVIG及S-IVIG可以以剂量依赖性的方式抑制LPS诱导的BV-2细胞活性氧自由基（Reactive oxygen species,ROS）的产生,在此基础上筛选出对BV-2细胞活性无影响的最佳IVIG及S-IVIG作用浓度,根据实验结果选择1 mg/m L IVIG与0.5mg/m L S-IVIG预处理BV-2细胞4h进行后续实验。将实验细胞分为四组:LPS组、IVIG+LPS组、S-IVIG+LPS组、空白对照组,应用ROS检测实验、NO检测实验及酶联免疫吸附（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）实验检测IVIG及S-IVIG抑制LPS诱导的氧化应激及炎性因子分泌的能力,比较其抑制能力与唾液酸化程度的关系。其中每次试验不同分组均设置三个复孔,每组6个生物学重复。结果:1.不同浓度的IVIG组、S-IVIG组BV-2小胶质细胞活性与正常对照组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。2.LPS可以诱导BV-2细胞产生ROS,IVIG及S-IVIG可以以剂量依赖性的方式抑制LPS诱导的BV-2细胞ROS的产生,在此基础上筛选出最佳IVIG及S-IVIG浓度。后续实验选取1 mg/m L IVIG与0.5mg/m L S-IVIG预处理BV-2细胞4h进行实验。1mg/m L IVIG与0.5mg/m L S-IVIG预处理均具有良好的抑制LPS诱导的小胶质细胞ROS的能力（P≤0.05）,并可以显著降低BV-2上清NO浓度（P≤0.05）,且0.5mg/m L培养终浓度的S-IVIG效果更为显著。3.LPS可以诱导小胶质细胞系BV-2细胞上清培养液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白介素-1β（IL-1β）及白介素-6（IL-6）的释放,1 mg/m L IVIG与0.5mg/m L S-IVIG预处理均具有良好的抑制TNF-α,IL-1β及IL-6分泌的能力（P≤0.05）;0.5mg/m L S-IVIG相比于1 mg/m L未富集唾液酸的IVIG,显示更加出色的抑制炎症因子分泌的能力。结论:不同浓度的IVIG及S-IVIG分别单独作用于BV-2小胶质细胞时对其活力无明显影响,IVIG及S-IVIG分别预处理均可抑制LPS诱导的小胶质细胞损伤模型氧化应激及炎症因子释放水平,且S-IVIG较IVIG预处理效果更佳。这一研究结果表明IVIG可能是通过其唾液酸化水平进而发挥良好的神经保护作用,这一结果支持IVIG治疗AD临床试验失败的原因可能是由于其唾液酸化程度不足所致,可以此为突破口进一步进行S-IVIG治疗AD的临床试验。
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