论文部分内容阅读
目的:观察甘草酸对人结肠癌lovo细胞增殖及迁移的影响并初步探讨其可能机制。方法:1.将人结肠癌lovo细胞分为四组,对照组、甘草酸G1组(100ug/L)、甘草酸G2组(200ug/L)、甘草酸G3组(400ug/L),对照组仅添加培养基。2.采用CCK-8法检测不同浓度甘草酸对lovo细胞增殖的影响。将lovo细胞接种在96孔培养板上,按照上述分组进行处理,同时置于37℃5%CO2培养箱中培养24、48、72小时后,加入CCK-8溶液,在全自动酶联免疫测试仪上测量450nm波长处的吸光度值,每组重复3次检测,取其平均值来计算细胞增殖抑制率。计算公式:(甘草酸实验组吸光度值一本底组吸光度值)/(对照组吸光度值-本底组吸光度值)X100%。3.采用Transwell试验测定不同浓度甘草酸对lovo细胞迁移的影响。将lovo细胞按照上述分组处理后接种于transwell小室的上层内,将DMEM培养溶液加入到下室,置入37℃5%CO2培养箱中培养24h后,经处理后加入结晶紫溶液,置于培养箱中再孵育30分钟后在显微镜下拍照,计数并重复试验3次。4.将lovo细胞按照上述分组处理,24小时后,采用Western-blot方法检测lovo细胞中β-Catenin蛋白和Cyclin D1蛋白表达的情况。5.将lovo细胞按照上述分组处理,24小时后,通过RT-PCR法检测lovo细胞中β-Catenin mRNA和Cyclin mRNA表达的情况。实验结果:1.甘草酸能抑制lovo细胞的增殖,甘草酸浓度越高,作用时间越长,抑制越明显,呈时间、浓度依赖性。2.甘草酸能抑制lovo细胞的迁移,甘草酸浓度越高,抑制越明显,呈浓度依赖性。3.甘草酸能抑制Wnt信号通路相关蛋白,β-Catenin蛋白,及其靶蛋白Cyclin D1的表达,浓度越高,抑制越明显,呈浓度依赖性。4.甘草酸能抑制lovo细胞中Wnt信号通路相关基因,β-catenin mRNA和Cyclin D1 mRNA的表达,浓度越高,抑制越明显,呈浓度依赖性。结论:1.甘草酸可以抑制人结肠癌lovo细胞的增殖及迁移。2.甘草酸可通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路发挥作用。