补体激活过程中释放的过敏性毒素C5a片段具有强烈的促炎反应,可以迅速激活多种炎症细胞释放细胞因子,产生强烈的免疫激活效果,具有作为疫苗分子佐剂的巨大潜力。本文以鱼类来源的过敏性毒素C5a作为候选分子佐剂,以鱼类重要细菌性病原迟钝爱德华氏菌的细菌载体疫苗以及重组蛋白疫苗为考察对象,在斑马鱼模型上初步证明了C5a具有促进疫苗免疫保护效果的作用,可作为分子佐剂进行鱼类疫苗的进一步开发。为了开发更为有效的鱼类DNA疫苗,我们对真核表达载体pcDNA3.1+进行了优化设计,将原有CMV启动子改造为添加了人T细胞白血病病毒长末端重复序列LTR的CMV/R启动子,同时添加土拨鼠转录后调节元件WPRE,从而构建了新的真核表达系统pc3.1-CW,上述表达系统具有显著增强的表达效果。基于上述优化过的真核表达系统pc3.1-CW,我们构建了同时表达迟钝爱德华氏菌保护性抗原ETAE-1227和分子佐剂C5a的候选疫苗。基于斑马鱼模型的疫苗免疫保护效果及免疫因子分析表明：以C5a为分子佐剂,采用双质粒共转染和双顺反子表达的方式所构建的DNA疫苗既能激活细胞免疫又能激活体液免疫,均能产生60%以上的免疫保护效果。本研究以斑马鱼过敏性毒素C5a为分子佐剂,优化并设计了真核表达系统,从而构建了安全高效的迟钝爱德华氏菌DNA疫苗,为鱼类DNA疫苗的开发打下了基础。