锯缘青蟹副溶血性弧菌分离鉴定及抗TLH单克隆抗体的制备

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锯缘青蟹(Scylla serrata)为十足目,短尾次目,梭子蟹科,青蟹属,是我国重要的食用蟹。近年来,我国的东南沿海海域发生严重病害,造成锯缘青蟹的大量死亡,使我国的水产养殖业蒙受巨大的经济损失。副溶血性弧菌是主要致病菌之一。本试验从病蟹中通过划线培养,挑取优势菌落,经青蟹攻毒感染试验,分离出一株致病菌S,并通过菌落形态、生理生化特征等方面,初步将S菌鉴定为副溶血性弧菌。从该菌中克隆不耐热性溶血毒素基因(tlh基因),并将含有tlh基因的pET32a(+)质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),在LB培养基中,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达出TLH蛋白。以纯化的TLH免疫小白鼠,经过间接ELISA法检测血清的效价,通过细胞融合方法获得了一株能稳定分泌TLH单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为:CH-112。
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