山核桃叶总黄酮苷元的制备、成分分析及急性毒性研究

来源 :浙江中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenchen3766
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:采用传统的中药有效成分提取技术,结合传统聚酰胺富集黄酮化合物技术,并在此基础之上进行创新,优化出山核桃叶总黄酮苷元的最佳制备工艺,然后应用柱色谱技术及波谱技术手段对山核桃叶总黄酮苷元部位的化学组分进行研究,最后运用现代毒理学方法,研究山核桃叶总黄酮苷元部位对小鼠的急性毒性,为山核桃叶总黄酮苷元的药理试验研究奠定基础,同时为开发利用山核桃叶提供一定的科学依据。方法:(1)采用乙醇回流方法提取山核桃叶总黄酮苷元,对乙醇浓度、液固比(V/M)、提取时间、提取次数等单因素进行考察,根据单因素考察的结果进行正交试验,由正交试验结果优化山核桃叶总黄酮苷元的最佳提取工艺条件。(2)用聚酰胺富集山核桃叶总黄酮苷元,分别考察聚酰胺型号、聚酰胺的用量及在山核桃叶总黄酮苷元提取液中加水体积等因素对聚酰胺吸附山核桃叶总黄酮苷元的影响,然后通过考察洗脱液浓度、洗脱液体积和除杂液的体积等因素对乙醇洗脱山核桃叶总黄酮苷元的影响,优化出山核桃叶总黄酮苷元的最佳富集工艺。(3)通过中药化学成分特有的显色指示反应鉴别山核桃叶40%乙醇洗脱部位含有的化学组分,然后采用传统的硅胶柱色谱、HPLC分析及制备技术结合1H-NMR、13C-NMR等波谱技术手段分离鉴定此部位含有的具体化学成分。(4)实验采用给小鼠灌胃(ig)不同浓度的山核桃叶总黄酮苷元溶液,观察并记录小鼠饮食、日常活动及死亡情况,计算其最大耐受量(MTD),并通过肉眼观察小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器及HE染色法观察小鼠肝脏、肾脏的病理切片,从而研究山核桃叶总黄酮苷元对小鼠的急性毒性作用。结果:(1)单因素及正交试验优化出山核桃叶总黄酮苷元的最佳提取工艺为:用95%的乙醇作为提取液加热回流提取,提取液(mL)与山核桃叶干粉(g)的比为25:1(V/M),提取时间为1Omin,一共提取2次。(2)加水量对聚酰胺吸附黄酮苷元效果有较大影响,洗脱浓度、洗脱体积对得到的山核桃叶总黄酮苷元纯度有较大影响,其最佳分离富集工艺为:以100-200目聚酰胺为吸附材料,10g山核桃叶干粉95%乙醇提取液,加入4g聚酰胺树脂,缓慢加入200mL蒸馏水稀释,减压浓缩至无醇味后,混悬液直接上柱;用300mL30%乙醇洗脱去除杂质后,收集800mL40%乙醇洗脱液;减压蒸干,可得纯度高达77.52%的山核桃叶总黄酮苷元。(3)山核桃叶40%乙醇洗脱部位除含有黄酮类化合物外,还含有多糖、苷类,鞣质类,酚类,有机酸类,蒽醌类和甾体等化合物,并且从此部位分离并鉴定出一个黄酮类化合物为杨芽黄素。(4)山核桃叶总黄酮苷元对小鼠急性毒性实验中,小鼠正常饮食活动,体重呈现正常增长趋势,无死亡情况出现,故无法测出山核桃叶总黄酮苷元对小鼠的LD50值,其最大耐受量为1130.7 mg·kg-1(相当于成人用量的7倍),实验结束后解剖小鼠,肉眼观察小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器色泽鲜艳,无明显病变现象,进一步HE染色结果显示各组小鼠的肝脏、肾脏均正常,无病变现象出现。结论:通过传统的加热回流提取方式优化出山核桃叶总黄酮苷元的最佳提取工艺,工艺稳定简单,易于操作,实验采用的聚酰胺分离富集山核桃叶总黄酮苷元具有创新性,得到的总黄酮苷元纯度较高,且工艺稳定简便,适于黄酮苷元类化合物的富集,山核桃叶40%乙醇洗脱部位还含有多糖、苷类,鞣质类,酚类,有机酸类,蒽醌类和甾体类等化合物,其对小鼠的急性毒性试验结果表明山核桃叶总黄酮苷元对小鼠几乎无急性毒性作用。
其他文献
营养不良是慢性阻塞性肺疾病(COPD)主要并发症之一,是影响疾病预后的重要因素。对COPD的营养支持治疗已逐渐成为国内外学者研究的热点。本文对我院2006年以来住院治疗的COPD合
目的研究米诺环素(MC)对实验性脑出血后碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响。方法选用雄性SD大鼠110只,随机分为ICH组(n=50)、MC组(n=50)及假手术组(n=10),ICH组、MC组随机分为1、2
目的探讨一种并发症少,切口小,效果好的注射式隆胸材料取出的方法。方法对42例注射式隆胸患者进行小切口抽吸手术,在乳房下皱襞稍偏外侧作长约0.5cm的皮肤切口,通过负压吸引
目的探讨经伤椎椎弓根植骨内固定治疗胸腰段骨折的可行性及临床疗效。方法经伤椎椎弓根植骨内固定治疗胸腰段骨折60例,受伤节段为T11~L2,术后及随访期间摄X片测量伤椎椎体成角
近年来,随着中国经济的不断发展和国际地位的日益提高,全世界学习汉语的热潮一浪高过一浪,我们的邻国印度也是一样。笔者有幸在印度南部泰米尔纳德邦担任汉语志愿者教师,在印