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目的NK/T细胞淋巴瘤(Natural Killer T–Cell Lymphoma,NKTCL)是一种中国高发的淋巴瘤亚型,具有高度侵袭性、病程进展快、预后差等特点。研究表明8-17%的肿瘤发生与炎症相关,炎症所致微环境和炎性因子可以作为肿瘤生长因子刺激肿瘤细胞生长。为阐明炎症因子在NKTCL发生发展中的作用,我们前期在患者血浆中进行了炎症因子的筛选并初步发现,IL-13在NKTCL病人血浆中异常表达,提示其在NKTCL的发生发展中可能发挥一定作用。本研究旨在探讨IL-13促进NK/T细胞淋巴瘤细胞增殖的作用及相关机制。方法1.分别从血浆、肿瘤组织、细胞层面观察IL-13及其受体在NKTCL中的表达情况。(1).血浆水平:通过Luminex方法检测61例NKTCL病人和24例健康体检者血浆组织的中IL-13表达水平,并分析了IL-13表达水平与病人临床特征的关系。(2).肿瘤组织水平:采用免疫组化的方法分别检测了IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2在40例NKTCL肿瘤组织和30例反应性淋巴结增生组织中表达情况。(3).细胞水平:采用western blot的方法检测了IL-13Rα1和IL-13Rα2在外周血正常NK细胞及4种NKTCL细胞系(YT,SNK-6,NKL,NK92)中的表达水平,并用ELISA方法检测上述细胞株培养基中IL-13的水平。2.体外实验观察IL-13对NKTCL细胞增殖和凋亡的影响。(1).用CCK-8,EDU,AnnexinV方法检测不同浓度IL-13(0,25,50,100 ng/mL)对NKTCL两种细胞系(YT,SNK-6)细胞增殖和凋亡的影响。(2).在细胞培养基中加入IL-13抗体(6.5μg/mL)阻断IL-13信号通路,5天后用CCK-8,EDU,AnnexinV方法检测分别检测细胞增殖和凋亡改变。3.明确IL-13在NKTCL中影响的下游信号通路。(1).用western blot方法观察不同浓度IL-13(0,25,50,100,200 ng/mL)作用于YT细胞2h后细胞中JAK-STAT通路蛋白的变化。(2).YT细胞培养基中加入anti-IL-13抗体或同时加入IL-13和anti-IL-13Rα1抗体,2h后用western blot方法观察细胞Stat6通路蛋白的变化。结果1.IL-13和IL-13Rα1在NKTCL中高表达。(1).NKTCL病人血浆组织中IL-13表达水平明显高于健康人(p<0.001),但与病人临床病理特征无明显联系。(2).IL-13和IL-13Rα1在NKTCL肿瘤组织中表达水平明显高于对照组,差异有明显统计学意义。其中有75%的肿瘤组织高表达IL-13(30/40,p<0.001),90%的肿瘤组织高表达IL-13Rα1(36/40,p<0.001)。而IL-13Rα2在两组的表达无明显差异。(3).IL-13Rs在NKTCL细胞系中的表达均高于正常NK细胞;上述NKTCL细胞株均能分泌一定水平的IL-13且均高于正常NK细胞的分泌水平。2.IL-13促进NKTCL细胞的增殖。(1).IL-13能促进YT和SNK-6细胞的增殖,并呈剂量依赖性,而对凋亡的影响不明显。(2).用IL-13抗体阻断IL-13后,YT和SNK-6的细胞增殖活力均下降,细胞凋亡无明显变化。3.IL-13通过IL-13Rα1激活NKTCL细胞中的JAK-STAT信号通路。(1).经不同浓度的IL-13刺激后,YT细胞中P-Stat6的表达水平升高,并呈剂量依赖性,而P-Stat3、P-Stat5表达无明显改变。(2).用anti-IL-13抗体或anti-IL-13Rα1抗体分别阻断IL-13或IL-13Rα1后,与未处理的细胞相比,YT细胞中Stat6的磷酸化水平明显下降。结论1.IL-13可作为自分泌因子通过IL-13/IL-13Rα1/P-Stat6这一通路促进NKTCL细胞的生长。2.阻断IL-13信号通路有望成为抑制NKTCL生长的新靶点,但仍需进一步研究。