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目的:银屑病是一种临床常见、难治愈的、多发性慢性皮肤炎症性疾病,属于自身免疫病的一种,其发病人数约占世界人口总数的2%～3%。目前银屑病发病机制虽尚不十分清楚,但大量研究表明,皮肤组织内炎症性免疫应答功能紊乱是导致其病变形成的主要诱因之一。以往研究报道,CCR6+Th17细胞在趋化因子CCL20的作用下迁移至皮损部位后,产生IL-17A、IL-22、IL-17F和TNF-α等炎性细胞因子,是银屑病免疫机制“恶性环路”形成中的主要效应细胞。然而,近年来越来越多的临床及基础研究证明,皮肤真皮γδT细胞亦是IL-17A和IL-22等细胞因子的重要来源细胞,并广泛参与银屑病发生和发展。有关皮肤γδT细胞免疫生物学作用的基础和临床研究也逐渐成为银屑病发病机制研究中的又一新焦点。以往,本课题组研究发现,TNF/TNFR超家族成员CD30L/CD30信号转导对黏膜相关淋巴组织中Th17细胞及IL-17A+Vγ6+γδT17细胞的活化和分化起重要的调控作用。另有报道表明,临床银屑病患者皮损组织内CD30L和CD30呈高表达。然而,有关CD30L/CD30信号转导在银屑病免疫学发病机制中的作用研究鲜有报道。为深入探讨皮肤T17细胞介导的银屑病病变形成中CD30L/CD30信号转导的作用机制,我们利用Cd30l基因敲除小鼠建立咪喹莫特(Imiquimod,IMQ)诱导的寻常型银屑病动物模型,系统详细地探讨CD30L/CD30信号转导对T17细胞介导的皮肤炎症性免疫应答的调控作用,同时评价单克隆抗体调节CD30L/CD30信号对小鼠银屑病的疗效。实验方法:1.利用C57BL/6小鼠建立银屑病动物模型:取小鼠皮损组织,提取总蛋白,利用WB技术检测皮损组织内CD30L蛋白的表达变化。利用Cd30l基因敲除小鼠(CD30LKO)建立IMQ诱导的银屑病动物模型,动态比较观测Cd30l基因缺失对小鼠银屑病皮肤炎症发生、发展的影响。2.利用WT、CD30LKO小鼠建立银屑病动物模型:利用流式分析技术:检测小鼠皮损组织和dLN内,中性粒细胞和巨噬细胞浸润的情况;CD4+或CD8+αβTCR+T细胞的浸润情况;γδ T细胞CCR6以及Ki-67的表达水平。3.利用体外实验,动态比较分析了 CD30L和CCR6在γδ T细胞亚群上表达相关性。4.研究皮损组织和dLN内γδT细胞,尤其是Vγ4+γδ T细胞的功能,即IL-17A、IL-22或IL-17F等的表达。5.利用刺激性单克隆抗体靶向CD30L/CD30信号,评价通过单克隆抗体调控CD30L/CD30信号是否对小鼠银屑病的疗效。实验结果:1.Cd30l基因缺失导致小鼠对IMQ诱导的银屑病易感性显著升高:结果充分证明Cd30l基因缺失导致小鼠IMQ诱导的银屑病皮肤炎症明显加重,小鼠对银屑病易感性显著增强,提示CD30L/CD30信号转导在银屑病发病机制中发挥重要的保护性作用。2.Cd30l基因缺失导致小鼠皮损组织内炎性细胞浸润增强:结果表明,Cd30l基因缺失能够促进小鼠dLN内表达CXCR2的CD11b+Gr-1+中性粒细胞向皮损组织内浸润,从而促进银屑病“恶性环路”的形成。3.Cd30l基因缺失导致皮损组织内Vγ4+γδT细胞归巢增强。4.Cd30l基因缺失选择性促进CD27-Vγ4+γδT细胞CCR6和Ki-67的表达,从而推动银屑病“恶循环路”的形成。5.CD30L/CD30信号转导可抑制Vγ4+γδT细胞CCR6的表达:CD30L/CD30信号转导的缺失选择性引起银屑病小鼠dLN内活化的Vγ4+γδT细胞持续表达高水平的CCR6,进而大量迁移至皮损组织,介导皮肤炎症应答。6.Cd30l基因缺失导致CCR6+Vγ4+γδT17细胞活化功能增强:通过产生大量的IL-17A、IL-22或IL-17F等γδT17相关细胞因子,诱导中性粒细胞皮损组织浸润,进而加重小鼠银屑病进程。7.CD30L/CD30信号靶向性抗体对WT小鼠银屑病疗效的评价:结果充分证明,单克隆抗体刺激CD30L/CD30信号转导可通过抑制Vγ4+γδT细胞的皮肤归巢能力以及相关γδT17细胞因子的分泌,部分抑制小鼠银屑病“恶性环路”的形成,进而对小鼠银屑病具有显著的治疗效果。因此,CD30L/CD30信号可能成为临床银屑病免疫生物学治疗的潜在候选靶点。结论:1.本研究利用CD30LKO小鼠建立IMQ诱导的银屑病动物模型,通过系统详细的体内、外实验证明了皮肤归巢型Vγ4+γδT17细胞表面CD30L与Cd30分子间相互作用能够抑制Vγ4+γδT17细胞CCR6的表达,下调IL-17A、IL-22和IL-17F等炎性细胞因子的产生,间接抑制中性粒细胞向皮损组织迁移,延缓银屑病发病机制中“恶性环路”的形成。2研究结果证明通过利用CD30L/CD30信号靶向性单克隆抗体调控CD30L/CD30信号对小鼠银屑病具有显著疗效。3研究结果阐明了CD30L/CD30信号转导在皮肤γδT17细胞介导的银屑病病变形成中发挥重要的保护性作用及其机制。