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背景子宫内膜癌是临床常见恶性肿瘤,其发病机制尚未完全阐明。多项研究表明,LncRNA-miRNA-m RNA在子宫内膜癌发生发展过程中发挥重要调控作用。长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(LncRNA TUG1)在子宫内膜癌发生发展过程中可能发挥致癌基因作用。生物信息学分析显示微小RNA-18 1a-5p(miR-181a-5p)可能是TUG1的靶基因,Notch受体2(Notch receptor 2,NOTCH2)可能是miR-181a-5p的靶基因。因此我们提出LncRNA TUG1是否通过调控miR-181a-5p/NOTCH2对子宫内膜癌生物学特性产生影响。目的探究基于LncRNA TUG1调控miR-181a-5p/NOTCH2对子宫内膜癌生物学特性的影响及其机制,为临床靶向治疗子宫内膜癌提供新途径。第一部分si-TUG1抑制子宫内膜癌细胞的生长方法1.通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)的方法检测TUG1在子宫内膜癌组织及细胞系中的表达水平。2.收集56例子宫内膜癌患者临床病理资料并进行5年随访,比较TUG1表达与患者临床病理特征的关系,以及采用Kaplan-Meier法分析TUG1表达与患者预后的关系。3.体外培养子宫内膜癌JEC、HEC-1B、RL952、Ishikawa细胞及子宫内膜上皮HEECs细胞,采用脂质体转染技术分别将si-NC、si-TUG1转染至子宫内膜癌HEC-1B、RL952细胞,应用甲基噻唑基四唑(MTT)实验检测细胞增殖力;Transwell实验检测细胞迁移及侵袭。结果1.TUG1在子宫内膜癌组织及细胞系中表达水平显著升高(P<0.05)。2.TUG1高表达与患者分化程度、临床分期、淋巴结转移、肌层浸润呈正相关(P<0.05),TUG1高表达组患者生存率显著低于低表达组(P<0.05)。3.沉默TUG1表达后细胞增殖能力显著降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数显著减少(P<0.05)。结论TUG1可促进子宫内膜癌恶性进展。第二部分TUG1通过miR-181a-5p/NOTCH2调控子宫内膜癌细胞生长的机制研究方法1.应用双荧光素酶报告实验与RIP实验验证TUG1与miR-181a-5p的靶向关系;应用qRT-PCR实验检测子宫内膜癌组织及不同细胞系中miR-181a-5p的表达水平;检测各组细胞增殖、迁移及侵袭能力。2.应用双荧光素酶报告实验与RIP实验验证miR-181a-5p与NOTCH2的靶向结合关系;应用qRT-PCR实验检测子宫内膜癌组织及细胞系中NOTCH2的表达;蛋白免疫印迹(Western blot)实验检测NOTCH2、TUG1及miR-181a-5p之间的调控关系。结果1.双荧光报告基因实验与RIP实验证明miR-181a-5p是TUG1的靶基因;miR-181a-5p在子宫内膜癌组织及细胞系中的表达水平显著降低(P<0.05),miR-181a-5p过表达可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.05)。2.双荧光素酶报告实验与RIP实验证明NOTCH2是miR-181a-5p的靶基因;NOTCH2在子宫内膜癌组织及细胞系中的表达水平显著升高(P<0.05);si-TUG1组miR-181a-5p的表达水平显著升高,共转染si-TUG1与anti-miR-181a-5p后细胞中NOTCH2的表达水平显著升高(P<0.05)。结论TUG1可通过调控miR-181a-5p/NOTCH2进而促进子宫内膜癌恶性进展。