DPVgJ基因主要抗原域表达及抗体制备

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shaodongjia1668
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本论文对鸭瘟病毒(DPV)gJ基因进行了生物信息学分析,原核表达了gJ基因去跨膜区和信号肽的截段基因gJ(M),并制备了截段基因表达蛋白的多克隆抗体,主要内容可归纳如下:1.鸭瘟病毒gJ基因的分子特性分析鸭瘟病毒gJ基因大小为1620bp,编码539个氨基酸,理论等电点为6.037。鸭瘟病毒gJ蛋白在其N端有信号肽,C端有一个跨膜区,阂值为0.5时共有32个潜在的磷酸化位点,这些位点包括15个丝氨酸位点,9个苏氨酸位点,8个酪氨酸预测位点。通过对gJ蛋白做二级结构预测,结果表明无规则卷曲的氨基酸含量高(占50.65%),为蛋白抗原表位提供了良好的空间。其ORF含62个稀有密码子,含量占33.3%,包括9个连续的稀有密码子串。2.鸭瘟病毒gJ截段基因的原核表达及多克隆抗体的制备成功构建了gJ全基因和gJ截段基因的重组原核表达质粒pET-32a(+)-gJ口pET-32(+)-gJ(M),并将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌中。IPTG诱导结果表明gJ全基因不能有效表达,gJ截段基因高效表达,得到与预期蛋白大小一致的约为30kDa的不可溶性蛋白,免疫印迹结果表明表达蛋白可与兔抗DPV血清发生特异性反应。对诱导表达条件进行优化得出最佳表达条件为力0.1mmol/L IPTG,在30℃水浴条件下诱导5h。纯化的重组蛋白免疫兔子制备兔抗gJ(M)抗体,琼脂糖扩散试验表明其效价为1:32。
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