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研究背景：肝纤维化是各种原因引起肝损伤时发生的愈合反应，是慢性肝病发展为肝硬化的中间阶段。肝纤维化的发生是一个由多种细胞和细胞因子参与的复杂过程，肝星状细胞（hepaticstellatecells，HSC）是各种因子作用的主要靶细胞。细胞因子通过复杂的信号转导通路作用于HSC，其中包括经典的TGFβ1/Smad信号通路以及MAPK信号通路、JAK/STAT信号通路等。近年来MAPK信号通路在肝纤维化发生中的作用逐渐成为热点，其中细胞外信号调节激酶1/2（extracellularsignalregulatedkinase，ERK1/2）信号通路是研究的最为清楚的。ERK1/2信号通路可被多种细胞因子和有丝分裂原激活，进而调节HSC的生物学活性，其中包括最强的致纤维化因子转化生长因子β1（TGFβ1）。胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1（insulin-likegrowthfactorbindingproteinrelatedprotein1，IGFBPrP1）是一种由多种细胞分泌的可溶性糖蛋白，其生物学功能尚未完全明确。导师刘立新课题小组前期研究发现IGFBPrP1在肝纤维化患者肝组织中的表达明显高于对照组，且与肝组织中TGFβ1的表达呈正相关；腹腔注射IGFBPrP1可使野生型小鼠的肝组织发生肝纤维化，同时使其肝组织中TGFβ1、p-Smad2/3的表达均增加。那么，IGFBPrP1是否可激活体外培养的肝星状细胞的TGFβ1/Smad3信号通路和ERK1/2信号通路呢？目前尚未见报道。为了阐明上述问题，设计了本课题。第一部分IGFBPrP1对肝星状细胞TGFβ1/Smad3信号通路的影响目的：探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1（IGFBPrP1）对肝星状细胞TGFβ1/Smad3信号通路的影响。方法：体外培养人肝星状细胞株（LX-2），设立空白对照组[加入等量磷酸盐缓冲液（PBS）]和IGFBPrP1处理组（加入终浓度为30μg/L的IGFBPrP1），作用24h后分别收集两组细胞培养上清液，并提取全细胞蛋白。采用Westernblot法检测细胞培养上清液中Ⅰ型胶原（ColagenⅠ）、纤维连接蛋白（Fn）、转化生长因子β1（TGFβ1）以及LX-2细胞中Smad3、p-Smad2/3的表达变化。结果：1．IGFBPrP1对LX-2细胞CollagenⅠ和Fn表达的影响：IGFBPrP1处理组细胞培养上清液中CollagenⅠ和Fn的蛋白表达量较空白对照组显著增高（CollagenⅠ：0.68±0.07vs0.49±0.05，t=4.157，P<0.05；Fn：0.54±0.07vs0.37±0.04，t=3.982，P<0.05），差异有统计学意义。2．IGFBPrP1对LX-2细胞TGFβ1表达的影响：IGFBPrP1处理组细胞培养上清液中TGFβ1的表达较空白对照组显著增高（0.35±0.05vs0.21±0.04，t=3.906，P<0.05），差异有统计学意义。3．IGFBPrP1对LX-2细胞Smad3及p-Smad2/3表达的影响：IGFBPrP1处理组细胞中Smad3的表达与空白对照组比较无明显改变（0.65±0.05vs0.64±0.05，t=0.084，P>0.05）；IGFBPrP1处理组细胞中p-Smad2/3的表达较空白对照组显著增高（0.70±0.05vs0.46±0.03，t=8.050，P<0.05），差异有统计学意义；IGFBPrP1处理组p-Smad2/3与Smad3的比值较空白对照组显著增高（1.10±0.12vs0.72±0.05，t=5.181，P<0.05），差异有统计学意义。结论：1．IGFBPrP1可使体外培养的LX-2细胞ECM的重要成分CollagenⅠ和Fn的分泌增加。2．IGFBPrP1可促进体外培养的LX-2细胞产生TGFβ1。3．IGFBPrP1可使体外培养的LX-2细胞中Smad3的磷酸化增加。第二部分IGFBPrP1对肝星状细胞ERK1/2信号通路的影响目的：探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1（IGFBPrP1）对肝星状细胞ERK1/2信号通路的影响。方法：体外培养人肝星状细胞株（LX-2），设立空白对照组[加入等量磷酸盐缓冲液（PBS）]和IGFBPrP1处理组（加入终浓度为30μg/L的IGFBPrP1），作用24h后分别提取两组细胞的全细胞蛋白。采用Westernblot法检测LX-2细胞中ERK1/2、p-ERK1/2的表达变化。结果：IGFBPrP1对LX-2细胞ERK1/2及p-ERK1/2表达的影响：IGFBPrP1处理组细胞中ERK1/2的表达与空白对照组比较无明显改变（0.55±0.07vs0.54±0.05，t=0.286，P>0.05）；IGFBPrP1处理组细胞中p-ERK1/2的表达较空白对照组显著增高（0.33±0.04vs0.17±0.02，t=7.538，P<0.05），差异有统计学意义；IGFBPrP1处理组p-ERK1/2与ERK1/2的比值较空白对照组显著增高（0.61±0.07vs0.31±0.04，t=7.535，P<0.05），差异有统计学意义。结论：IGFBPrP1可使体外培养的LX-2细胞中ERK1/2的磷酸化增加。