成牙本质细胞是牙髓-牙本质复合体的特征性细胞,其功能是在牙齿发育期间和成熟牙内生成牙本质,它是牙齿中唯一能在牙本质形成与修复中起作用的细胞。因此,对成牙本质细胞的功能调控的研究有助于对牙齿发育、损伤与修复等过程的深入理解。 肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associatefactor,TRAF6)是近年来备受重视的细胞浆内的多功能信号分子,现己证实,它不仅与骨代谢和胚胎正常发育密切相关,还参与介导了LPS/IL-1、CD40和RANK的信号转导。牙本质作为牙齿硬组织,和骨组织的生物学特性有很多相似之处,那么TRAF6是否参与牙本质的发育过程?它对成牙本质细胞的增殖、矿化及损伤修复功能究竟发挥何种调控作用?本研究对于这些问题进行了探索性研究。具体内容如下: 1.TRAF6在鼠牙胚组织和成牙本质细胞中表达的研究 首先通过免疫组织化学染色的方法,在组织水平阐明了TRAF6几乎在大鼠牙胚发育全过程呈动态时空表达模式,尤其在成牙本质细胞呈持续强阳性表达。接着运用RT-PCR、免疫组织化学染色和免疫荧光染色的手段,分别从基因和蛋白水平首次证实了TRAF6在永生化成牙本质细胞样细胞MDPC-23中表达,为进一步研究TRAF6对成牙本质细胞功能的调控作用奠定了可靠的基础。 2.RNAi法研究TRAF6对成牙本质细胞增殖、矿化过程的调控作用 RNAi技术是当前研究基因功能的崭新的强有力工具。第一步,我们首先成功构建了2个pSUPER-TRAF6 siRNA的真核表达载体,并通过瞬