阿尔茨海默病是一种以进行性认知功能障碍及人格改变为主要临床表现的神经系统变性疾病。Aβ的神经毒作用长期以来被公认为是导致阿尔茨海默病发病的重要因素。传统的研究多集中在Aβ在细胞外沉积所致神经毒作用上，针对AD的治疗和预防也主要侧重于如何防止Aβ在细胞外聚集及清除老年斑方面。然而新近研究发现，在AD患者神经细胞外尚未形成神经纤维缠结和老年斑时，胞浆内已有Aβ的存在。细胞内可溶性的Aβ可损伤线粒体，、影响细胞信号系统关键蛋白的活性、激活P53基因而调节Bax蛋白的表达诱导神经细胞凋亡。现阶段国内外关于Aβ细胞内中毒学说的研究还处在早期阶段，尚未有研究者成功构建稳定表达Aβ的细胞模型。然而，为了阐明Aβ42的细胞内毒性机制和其时效性，需要在细胞水平上建立一个长期稳定表达Aβ42的细胞系。基于这个目的，本研究构建了重组质粒pIRES2-EGFP-Aβ42，并转染小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞，建立稳定表达Aβ42的Neuro-2a细胞系，从而为研究Aβ的细胞内毒性机制提供了新的途径。主要研究方法：分别酶切质粒pGEMT-Aβ42和pIRES2-EGFP-LHX8，获得Aβ42基因和pIRES2-EGFP骨架，以T4DNA连接酶连接，构建重组质粒pIRES2-EGFP-Aβ42；并将pIRES2-EGFP骨架以T4DNA连接酶连接构建空载质粒pIRES2-EGFP。将上述重组质粒及空载质粒酶切鉴定后，采用脂质体介导法分别转染Neuro-2a细胞，在倒置荧光显微镜下观察目的基因在N2a细胞内的转染效率；800mg/L G418筛选4周，后续培养过程中G418浓度维持在200mg/L。以低密度扩增细胞，用于HE染色观察细胞形态。MTT法检测细胞增殖，用免疫组织化学染色法检测转染细胞内的Aβ₄₂的表达及tau蛋白的分布。主要研究结果：酶切鉴定显示重组质粒pIRES2-EGFP-Aβ₄₂及空载质粒pIRES2-EGFP构建正确。将重组质粒pIRES2-EGFP-Aβ₄₂及空载质粒pIRES2-EGFP转染Neuro-2a细胞，经G418筛选后扩增的细胞均表达绿色荧光蛋白，呈现绿色荧光。HE染色结果显示低密度培养条件下，Aβ₄₂转染细胞形态未发生明显改变。MTT结果显示低密度培养条件下，与对照组比较，Aβ₄₂转染细胞保持正常的增殖能力，未发生明显细胞凋亡。免疫组织化学染色显示经G418筛选后，转染重组质粒的N2a细胞表达Aβ₄₂，而转染空载质粒的N2a细胞及空白对照N2a细胞内无Aβ₄₂表达；转染重组质粒的N2a细胞内tau蛋白聚集成颗粒或小团块状，而空载质粒及空白对照组细胞内tau蛋白分布均匀，无颗粒或团块。结论：成功构建了重组质粒pIRES2-EGFP-Aβ₄₂及pIRES2-EGFP空载质粒，并将重组质粒及空载质粒成功转染到N2a细胞，获得了稳定表达Aβ₄₂的N2a/Aβ₄₂细胞系，证实了N2a/Aβ₄₂细胞是理想的AD细胞模型，为AD的体外研究提供了新的方法。