牙髓受到一定外界刺激，其内的神经、血管以及牙髓牙本质复合体会出现相应的反应，发挥防御功能。牙髓的防御功能包括疼痛、炎症反应和修复性牙本质形成。成纤维细胞是牙髓中的主要细胞，又称为牙髓细胞，它在牙髓创伤修复机制中发挥重要作用，其合成的基质包绕和支持着牙髓中的各种有形成分，并且是血管与细胞之间传递营养物质和废料的重要介质，同时成纤维细胞及其合成的基质也是抵抗细菌和毒性产物在牙髓组织中扩散的一道屏障。因此，成纤维细胞的健康状态反映了牙髓活性及其抵御外来有害刺激的潜能。近年的研究发现成纤维细胞除了具有合成胶原和基质的基本功能外，还能产生多种炎症介质和表达多种免疫受体，进而参与牙髓的天然和适应性免疫防御反应。然而成纤维细胞如何识别外来抗原以进行免疫防御的机制尚不清楚。最新研究发现核苷酸结合寡聚化结构域(nucleotide-binding oligomerization domain，NOD)蛋白是胞浆型模式识别受体(pattern recognition receptor，PRR)中的一个重要家族，与Toll样受体(Toll-like receptor，TLR)相似，是天然免疫中对病原微生物的病原体相关分子模式(pathogen associated molecular pattern，PAMP)的一类感受器，其识别配体、信号转导均有别于膜型PRR，在机体天然免疫应答中发挥重要功能。其中NOD2是研究较多的受体之一，它能与几乎所有细菌肽聚糖(peptidoglyans，PGNs)的亚单位结构胞壁酰二肽(muramyl dipeptide，MDP)结合，进而启动天然免疫，并成为联系适应性免疫的纽带。NOD2受体在机体免疫应答中发挥独特的功能，与多种炎症性疾病相关。牙髓病、根尖周病是以革兰氏阳性(Gram-positive，G+)细菌和革兰氏阴性(Gram-negative，G-)细菌的混合感染，细菌细胞壁表面的PAMP除脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)外，还有PGNs等毒力因子。然而牙髓组织是否通过表达NOD2受体进行免疫防御，目前暂未明了。 目的： 研究人正常及炎症牙髓组织和体外培养的人牙髓细胞中NOD2的表达和分布特点，探讨NOD2受体在牙髓组织天然免疫防御中的作用，了解NOD2受体与牙髓炎症发生发展的关系。 方法： ①收集因阻生或正畸治疗需要拔除的年轻健康完整恒牙，Ⅰ型胶原酶消化组织块法原代培养人牙髓细胞(human dental pulp cells，HDPCs)，取第4代HDPCs采用MTT比色法测定细胞生长曲线；免疫组织化学方法进行波形丝蛋白和角蛋白染色，鉴定细胞组织学来源；②从新鲜拔除的人健康第三磨牙获取牙髓组织并收集Ⅰ型胶原酶消化组织块法体外培养人牙髓细胞；巢式逆转录聚合酶链反应(Nested reverse transcription-polymerase chain raction，Nested RT-PCR)检测人正常牙髓组织和牙髓细胞中NOD2 mRNA的表达情况；采用免疫组织化学技术和免疫印迹方法检测NOD2蛋白的表达和定位。③收集人炎症牙髓组织标本采用免疫组织化学技术对NOD2蛋白进行定位，同时利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Fluorescence quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,FQ-PCR)的方法对正常和炎症牙髓组织NOD2 mRNA表达水平进行相对定量分析。 结果： ①本研究采用I型胶原酶消化组织块法体外培养人牙髓细胞，成功培养出HDPCs，牙髓组织块经消化后接种约4～6天，可见细胞从组织块周围呈辐射状爬出，2周左右出现汇合，可进行传代；MTT结果显示细胞具有较强的增殖活性，细胞1～3天生长相对缓慢，处于缓慢生长期，第3～6天进入对数生长期，细胞数量持续升高，第6天以后生长相对缓慢，细胞生长进入平台期。细胞来源鉴定结果显示，体外培养的牙髓细胞均为抗波形丝蛋白染色阳性，抗角蛋白染色阴性，提示细胞来源于间叶组织，无上皮成分混杂，符合牙髓组织学特征。②NestedRT-PCR．发现正常牙髓组织可表达NOD2 mRNA，产物大小为95bp，但未能检测到牙髓细胞NOD2 mRNA的表达；免疫印迹方法检测到正常牙髓组织和牙髓细胞在36-55kDa附近出现蛋白条带；免疫组织化学显示正常牙髓组织中成牙本质细胞、血管内皮细胞NOD2蛋白免疫反应阳性，成纤维细胞未见NOD2蛋白明显表达。③FQ-PCR结果显示人炎症牙髓组织中NOD2 mRNA的相对表达量是正常牙髓组织的18倍左右，经student t检验，两者有显著性差异(p<0.05)；免疫组织化学显示正常情况下未见NOD2蛋白明显表达的牙髓成纤维细胞也有阳性表达。 结论： 正常牙髓组织通过表达NOD2受体参与牙髓牙本质复合体的天然免疫反应，NOD2在抵御牙髓外来病原微生物的宿主免疫防御中起重要作用。炎症牙髓NOD2受体表达上调，可能参与了牙髓炎症发生发展的过程。