葛根素对臂丛根性撕脱伤大鼠脊髓前角GFAP、iNOS、CGRP蛋白表达的影响

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目的:探讨中药葛根提取物葛根素对大鼠臂丛神经根性撕脱伤(brachial plexus root avulsion injury,BPRAI)脊髓前角GFAP、iNOS、CGRP蛋白表达及血清iNOS表达的影响。方法:50只成年雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、葛根素低、中、高剂量治疗组,每组10只。采用椎管内撕脱大鼠右侧脊髓C5-C7脊神经前根、同时剪断C5-C7后根的方法进行BPRAI造模。术后低、中、高剂量治疗组进行葛根素腹腔注射给药,剂量分别为50 mg·kg-1·d-1、100 mg·kg-1·d-1、200 mg·kg-1·d-1,正常组、模型组注射等体积生理盐水,连续给药4w。尼氏染色法检测大鼠脊髓前角α-运动神经元(α-motorneurons,α-MNs)的存活率,免疫荧光化学方法检测脊髓前角GFAP、p-Akt1/2/3蛋白表达,比色法测定血清iNOS和总NOS的含量,免疫印迹方法检测损伤侧脊髓GFAP、iNOS、CGRP的蛋白表达。结果:1.尼氏染色结果显示:与正常组相比,模型组损伤侧脊髓前角α-MNs存活率显著降低(P<0.01);与模型组比较,中、高剂量的葛根素治疗可显著提高α-MNs的存活率(P<0.01)。2.免疫荧光化学结果显示:与正常组相比,模型组损伤侧脊髓前角GFAP蛋白表达升高(P<0.01);与模型组相比,中、高剂量葛根素治疗组GFAP蛋白表达降低(P<0.01);与低剂量组相比,中、高剂量葛根素治疗组GFAP蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01)。与正常组相比,模型组损伤侧脊髓前角胶质细胞大量表达p-Akt1/2/3(P<0.01);与模型组相比,低、中、高剂量葛根素均可抑制胶质细胞表达p-Akt1/2/3(P<0.05或P<0.01);与低剂量组相比,高剂量葛根素均可抑制胶质细胞表达p-Akt1/2/3(P<0.05)。3.血清生化检测结果显示:与模型组相比,低、中剂量组的iNOS、总NOS表达升高(P<0.05或P<0.01);与低剂量组相比,高剂量组的总NOS表达下降(P<0.05)。4.免疫印迹实验结果显示:与模型组相比,高剂量组损伤侧脊髓iNOS蛋白表达下降(P<0.05);与低剂量组相比,高剂量组损伤侧脊髓iNOS蛋白表达下降(P<0.05)。与正常组相比,模型组GFAP蛋白表达增加(P<0.05);与模型组相比,低、中、高剂量组GFAP蛋白表达均下降(P<0.05)。与正常组相比,模型组CGRP蛋白表达下降(P<0.05);与模型组相比,高剂量组CGRP蛋白表达上升(P<0.05)。结论:葛根素可提高臂丛根性撕脱后脊髓前角运动神经元的存活率,其机制可能与其抑制脊髓前角星形胶质细胞活化以及iNOS、GFAP蛋白表达,促进CGRP蛋白表达有关,并且可能有p-Akt信号通路的参与。此外,其治疗作用呈现剂量依赖性,中、高剂量疗效最优。
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