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研究目的:研究通过RNA干扰技术沉默膀胱移行细胞癌(TCCB)细胞中PLCε基因的表达,旨在探讨PLCε信号通路在调控TCCB细胞转移中的作用,为TCCB的基因治疗提供新的思路。研究方法:①重组质粒载体的构建:设计合成2个针对PLCε基因的小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA),与具有荧光蛋白表达的pGenesil-1质粒连接,构建重组质粒分别命名为PLCε1、PLCε2及阴性质粒NP。重组质粒转染后用荧光显微镜观察重组质粒的绿色荧光强度,判断最佳转染时间及质粒与脂质体比例。②实验组与对照组转染重组质粒后对人膀胱癌T24及BIU-87细胞株转移侵袭能力的影响:利用RT-PCR和Westernblot方法分别从分子及蛋白水平检测T24及BIU -87细胞株中PLCε的表达变化;以Westernblot检测T24及BIU-87细胞株中PKC-α蛋白表达。采用免疫组织化学法和明胶酶谱分析检测细胞株MMP-2、MMP-9蛋白的表达情况;用Transwell小室侵袭试验研究转染组膀胱癌细胞侵袭转移能力的变化。研究结果:①经测序、凝胶电泳分析,成功构建2对针对PLCε的shRNA的阳性重组质粒PLCε1、PLCε2以及阴性对照重组质粒NP。②应用荧光显微镜观察发现重组质粒转染48h,质粒与脂质体比例为1:2时荧光强度最强。③RT-PCR和Westernblot检显示PLCε1、PLCε2转染成功后可下调T24、BIU-87细胞PLCεmRNA及其蛋白表达。④PLCε1、PLCε2转染成功使PKC-α蛋白表达较转染空质粒NP和未转染细胞减弱。⑤PLCε1、PLCε2转染细胞穿透侵袭小室滤膜的数目明显低于未转染细胞和空载NP转染细胞;免疫组化和明胶酶谱分析均显示转染PLCε1、PLCε2均使细胞分泌MMP-2、MMP-9明显低于未转染细胞和NP转染细胞。结论:构建的重组质粒PLCε1、PLCε2转染能够有效抑制人膀胱癌细胞株T24及BIU-87PLCε基因,并可能通过降低对PKC-α表达水平而对T24及BIU-87的体外侵袭转移能力产生抑制作用,从而抑制膀胱肿瘤发展、恶化。为膀胱癌基因治疗的临床应用开辟了新的思路。