论文部分内容阅读
目的:通过心水通复方水提物（XST）干预慢性心力衰竭（CHF）大鼠,观察心功能、心肌病理变化、心肌含水量及心肌组织水通道蛋白（AQPs）表达的变化,从而探究该药物对CHF心功能影响的作用机制。方法:阿霉素诱导大鼠构造CHF模型,并分别用XST低剂量4.9g·kg-1、中剂量9.8g·kg-1、高剂量19.6g·kg-1三个不同浓度灌胃CHF大鼠30天。并观察记录各组大鼠的行为活动、饮食量和体重变化;在造模前、造模后、给药15天、给药30天四个阶段行小动物超声影像系统分别检测每组大鼠心功能;给药30天后处死,检测大鼠血清心肌肌钙蛋白（cTnⅠ）浓度、心肌重塑指标以及心肌含水量,并观察心肌组织和病理显微结构;采用Q-PCR、IHC及Western Blot等方法检测心脏AQP-1,4,7mRNA和蛋白表达。结果:1.心功能的超声影像:阿霉素诱导的模型大鼠射血分数（LVEF）≤50%,即确认CHF模型构造成功。与正常组相比,CHF模型组大鼠左室的收缩末期前壁厚度（IVSs）、舒张末期前壁厚度（IVSd）、收缩末期后壁厚度（LVPWs）、舒张末期后壁厚度（LVPWd）、LVEF、短轴缩短率（LVFS）降低（P<0.05）,收缩末期内径（LVIDs）、舒张末期内径（LVIDd）明显升高（P<0.01）。给药期间,与模型组相比,XST低剂量组LVIDs降低（P<0.05）,LVPWd、LVEF、LVFS升高（P<0.05）;中、高剂量组IVSs、IVSd、LVPWs、LVPWd、LVEF、LVFS增加（P<0.05）,LVIDs、LVIDd明显降低（P<0.01）。实验过程中发现,CHF模型组大鼠心功能进行性恶化。同组别间比较,XST中、高剂量组给药30天的心功能明显比给药15天有更好的改善,其中,高剂量组心功能改善更为显著。提示该药物能改善心力衰竭的心功能。2.行为体征观察:CHF模型组大鼠活动能力、精神状态差,饮食量逐渐减少,体重降低,并伴有严重腹水、便溏等明显心衰症状,大鼠死亡率高。与模型组相比,XST中、高剂量组大鼠饮食量和体重增加（P<0.05）,行为体征各方面较好,死亡率低。提示该药物能改善心力衰竭大鼠生活质量,延长生命。3.血清cTNⅠ浓度:与正常组大鼠相比,CHF模型组大鼠血清cTNⅠ浓度明显增加（P<0.01）。与模型组相比,XST低剂量组cTNⅠ浓度降低（P<0.05）,中、高剂量组cTNⅠ浓度显著降低（P<0.01）,其中高剂量组浓度水平最低。提示该药物对心肌细胞具有良好的保护作用。4.心脏质量指数及心肌含水量:与正常组相比,CHF模型组大鼠左室游离壁心肌细胞直径、心脏质量指数、左心室质量指数、心肌含水量均明显增加（P<0.01）;与模型组相比,XST中、高剂量组大鼠的心肌纤维直径、心脏质量指数、心肌含水量降低（P<0.05）,其中高剂量组的各项数据改善更为显著。提示该药物不仅能改善心力衰竭心肌的重塑,还能改善心衰的心肌水肿。5.心肌组织病理:正常组大鼠的心肌纤维排列整齐,未见细胞出现病理性改变;模型组显示,大鼠心肌细胞肥大,心肌纤维呈波浪形排列,部分细胞出现变性、坏死,间质增宽;XST低剂量组心肌细胞肥大程度略低于模型组,排列紊乱,可见部分肌纤维断裂,心肌间质增宽;XST中、高剂量组大鼠的心肌纤维排列较致密,细胞肥大、变性、坏死程度均较模型组降低,其中高剂量组心肌细胞改善尤为明显。提示该药物能改善心衰心肌的重塑,对心肌细胞具有保护作用。6.Q-PCR检测AQP-1,4,7mRNA表达:CHF模型组大鼠心脏AQP-1,4,7mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。与模型组相比,XST低剂量组AQP1mRNA表达水平降低（P<0.05）,中剂量组AQP-1,4,7mRNA和高剂量组AQP-1,4mRNA表达水平明显降低（P<0.01）;其中,XST高剂量组AQP1mRNA表达水平比中剂量低,而中剂量组AQP-4,7mRNA表达水平比高剂量组低。提示,该药物对心衰大鼠心脏AQP-1,4,7mRNA具有不同程度的调节作用,中剂量组对AQP-4,7mRNA作用较强。7.IHC检测AQP-1,4,7蛋白表达:AQP-1,4,7主要位于大鼠心脏血管内皮细胞和心肌细胞。与正常组比较,CHF模型组大鼠心肌AQP-1,4,7蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组相比,XST低剂量组AQP1表达水平降低（P<0.05）,中剂量组AQP-1,4,7蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,高剂量组AQP-1,4表达水平明显降低（P<0.01）。在三个剂量组中比较,AQP1在XST高剂量组表达水平最低,AQP-4,7在中剂量组表达水平最低。提示,不同剂量或相同剂量的XST对心肌AQPs的调节作用不同。8.Western Blot检测AQP-1,4,7蛋白表达:CHF模型组大鼠心肌AQP-1,4,7蛋白表达水平较正常组升高（P<0.05）。与模型组相比,XST低剂量组AQP1表达水平明显降低（P<0.01）,中剂量组AQP-1,4,7蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,而AQP-1,4在高剂量组降低幅度明显（P<0.01）,在三个剂量组中比较,AQP1在XST高剂量组降低幅度最大,而AQP-4,7在中剂量组降低幅度最大。结论:心水通复方水提物能改善慢性心衰大鼠心肌细胞结构、心肌水肿和心功能,提高大鼠生存质量及存活率,其机制可能与该药物调节慢性心衰心脏AQP-1,4,7mRNA和蛋白水平的过度表达有关。