【摘 要】
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该研究采用噬菌体表面呈现这一新兴的生物学技术,从华支睾吸虫感染患者外周血淋巴细胞中提取RNA,经逆转录、PCR扩增出抗体轻链和重链FD基因,再先后克隆入噬粒载体pComb3,经电
【出 处】
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中山医科大学 中山大学中山医学院 中山大学
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该研究采用噬菌体表面呈现这一新兴的生物学技术,从华支睾吸虫感染患者外周血淋巴细胞中提取RNA,经逆转录、PCR扩增出抗体轻链和重链FD基因,再先后克隆入噬粒载体pComb3,经电转化大肠杆菌XL1-blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建抗华支睾吸虫Fab片段的噬菌体抗体库.在此基础上,通过体外培养华支睾吸虫成虫,收集成虫的排泄、分泌物(代谢抗原)作为靶抗原,从华支睾吸虫噬菌体抗体库中筛选抗体组合,再通过交叉筛选,剔除与其它相关吸虫有交叉反应的抗体克隆,以期获得与华支睾吸虫循环抗原特异结合的抗体克隆.结果表明,我们已构建了抗华支睾吸虫噬菌体抗体库,库容为5.6×10<6>,滴度为7.5×10<13>cfu/ml,基本上达到建库要求,能满足多样性的需要,所以成功地筛选出抗循环抗原噬菌体抗体;经ELISA和Western-blot证实,它们具有高度的特异性.同时,构建的抗华支睾吸虫噬菌体抗体库为筛选其他可用于诊断的抗体、以及将来进一步的抗原表位分析和有效表位筛选提供了库源.
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