基于新型分子信标信号放大技术检测肿瘤相关基因的研究

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nnljn
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
癌症是严重危害人类健康和生命的重要疾病。其生长迅速、耗能大、易转移,难以彻底治愈。治疗癌症的关键因素是在其早期阶段对其进行精确的诊断并及时采取有效干预措施。癌症是基因变异疾病,在早期阶段准确捕获这些变异信息对癌症的早期诊断具有重要的临床价值,伴随分子生物学技术的发展,使利用分子生物学方法早期检测肿瘤变异基因成为可能。传统的肿瘤核酸标志物检测方法存在灵敏性差、成本高、操作复杂、对病人造成创伤等缺陷,因此亟待开发出易于操作、成本低、高灵敏、无创的早期肿瘤诊断技术。因核酸探针具有易于合成、易于修饰、生物兼容性好、具有高效的信号传导机制等优点,在肿瘤检测及药物靶向运输领域引起了广泛关注。基于以上论述,本研究构建了基于核酸探针的信号放大传感系统用于检测p53基因和miR-21等肿瘤相关基因。  第一章构建了基于回文的多功能分子信标信号放大系统用于检测p53基因。由于传统的基于酶的等温扩增技术中,除了识别元件和目标分子外,引物、模板、荧光报告基团也是必不可少,这样既使检测繁琐也增加了检测成本。为了解决这个问题,并受到回文结构启发,我们首次将回文序列引入分子信标3’端构建了一种基于回文的荧光修饰的多功能分子信标(简称 P-MB),使得一个核酸探针同时具有识别元件、引物、模板、报告基团等多种功能。我们的检测体系在即使只有微量目标存在时只需要一个核酸探针就可以实现荧光信号累积放大,从而检测出低浓度的目标分子。实验结果证明我们的检测系统具有较高的灵敏性和特异性,并能检测实际样本中 p53基因;此外,研究证明我们的检测系统可以同时、较好地检测多个目标分子。因此,该技术在核酸或其他分子检测方面具有很好的应用前景。  第二章构建了基于环辅助的的新型分子信标检测miR-21的传感系统。本研究中,我们设计的新型分子信标在人工合成的环状DNA探针辅助下具备识别目标、引物、模板及荧光报告多种功能。该系统中每个环(简称Cir)可以与三个分子信标(MB)结合形成Cir/3MB。无目标存在时,分子信标发夹牢牢锁住,一方面使荧光基团Cy3荧光猝灭,另一方面锁住临近分子信标3’末端结合位点。相反,当目标与Cir/3MB杂交后才可启动链置换反应(SDA),最终实现荧光信号累积放大。此外,该检测系统可以对人乳腺癌细胞 MCF-7细胞中的miR-21进行细胞成像。  第三章是对我们的科研工作做出的总结。
其他文献
目的:脊髓型颈椎病(CSM)是老年人最为常见的脊柱功能障碍之一。尽管大部分患者手术效果良好,但对这类疾病目前尚无很好的指标准确地预测患者术后的功能预后。有研究报道认为,MR
目的:  肝癌(HCC)是目前全世界最普遍的恶性肿瘤之一,其特点是恶性程度高,发展迅速,治疗复杂,生存率低。在全世界肿瘤中肝癌发病率占第五位,死亡率占第二位,分布主要以我国等发展中
前、后筋膜囊下注射TA预防糖尿病性白内障术后黄斑水肿的疗效分析  目的:  评价白内障手术前2天前、后筋膜囊下注射20mg曲安奈德(TA)预防糖尿病性白内障术后黄斑水肿的临床
目的:探讨褪黑素(melatonin,MLT)对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)慢性间歇性缺氧SD大鼠心肌LDH、CK-MB及Na+-K+-ATPase的表达变化,研究MLT对常压下OSAHS慢性间歇性缺
目的:  探讨后循环脑梗死复发与椎动脉优势及其它危险因素的相关性,为其二级预防提供参考。  材料和方法:  回顾性收集2007年9月至2013年1月发病14天以内就诊于中国医科大
目的:重症急性胰腺炎(SAP)时常见胃肠动力的下降,发生胃肠动力障碍,甚至出现胃肠功能衰竭,本文旨在探讨SAP伴胃肠动力障碍大鼠胃窦肌间神经节一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元和血管活性
前言:  卵巢癌是女性生殖器三大恶性肿瘤之一,近年来发病率逐渐上升,其死亡率位于妇科恶性肿瘤之首,5年生存率始终徘徊在25%-30%之间,严重威胁着妇女的生命。卵巢癌缺乏早期有效
随着社会的发展,肥胖、糖尿病、心血管等代谢相关疾病的发病率逐年提升。经研究发现代谢性疾病有一种共同的表现即血脂代谢紊乱。而引起血脂代谢紊乱的主要原因是血浆中运输脂
蝙蝠在人兽共患病(Zoonosis)的传播和流行中起重要的作用。随着人类活动范围不断扩大,蝙蝠的生存地遭到破坏。这就增加了人和蝙蝠的接触机会,促使高致病性的病毒由蝙蝠传播给人类
目的:研究降钙素原下降率(PCT-d)在脓毒血症治疗及预后评估的意义。  方法:本研究为前瞻性研究。纳入2012年8月-2013年12月河北省胸科医院ICU中收治的脓毒血症患者。共入选