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背景和目的:肺癌是当今世界范围内最常见的恶性肿瘤,严重危害人类生命健康。肺癌的生存率与临床分期有关,临床中很多患者确诊为肺癌时已是中晚期。需要寻找创伤较小而有效的检查手段帮助及早发现肺癌,从而提高肺癌患者的生存率。抑癌基因启动子区域的甲基化异常是基因失活的重要机制之一,与肿瘤的发生发展有着密切联系。DNA基因启动子的异常甲基化在多种恶性肿瘤中可被检测到,有望成为一种早期诊断标志物。本课题通过检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中SHOX2和RASSF1A基因启动子甲基化,分析其在肺癌组和良性疾病组中的表达情况,从而评估SHOX2和RASSF1A甲基化检测在肺癌诊断中的价值。方法:收集浙江大学医学院附属邵逸夫医院2014年7月至2015年10月的BALF,通过实时荧光定量PCR法(RT-PCR)和测序法检测SHOX2和RASSF1A基因启动子甲基化,并统计组织学和液基细胞学结果。结合组织学病理诊断结果,计算SHOX2和RASSF1A甲基化诊断肺癌的灵敏度和特异性,并比较甲基化和液基细胞学结果对肺癌的诊断效能。结果:1.收集2014年7月至2015年10月患者的支气管灌洗液305份,包括男性178例(58.4%),女性127例(41.6%),年龄范围23～85岁,主要集中在50～69岁。原发肺癌为123例,其他部位恶性肿瘤为18例,肺部良性病变为112例,肺部阴影或结节(不明确性质)52例。2.RT-PCR法检测支气管肺泡灌洗液SHOX2甲基化阳性为97例,阴性为208例,RASSF1A甲基化阳性为72例,阴性为233例。SHOX2和RASSF1A甲基化在肺癌组的阳性率为64.2%和50.4%,在对照组的阳性率分别为7.7%和3.8%,两组之间有显著性差异(P<0.01)。SHOX2和RASSF1A基因甲基化联合检测原发肺癌的灵敏度为71.5%,较单独检测可提高肺癌的诊断灵敏度。3.测序法检测支气管肺泡灌洗液SHOX2阳性为94例,阴性为211例,RASSF1A阳性为72例,阴性为233例。4.RT-PCR与测序法检测SHOX2和RASSF1A甲基化的一致率分别为99%和100%。5.在原发肺癌123例中,液基细胞学明确诊断癌有7例,诊断癌疑或异型细胞有16例。SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测原发肺癌的灵敏度显著高于液基细胞学的灵敏度。结论:1.RT-PCR法检测SHOX2和RASSF1A甲基化在肺癌组的阳性率高于对照组,两者具有显著统计学差异。2.SHOX2和RASSF1A甲基化在肺鳞癌、小细胞癌中的阳性率高于肺腺癌。3.RT-PCR和测序法检测SHOX2和RASSF1A基因甲基化有较高的一致性。4.SHOX2和RASSF1A甲基化检测较细胞学检查具有更高的灵敏度。5.SHOX2和RASSF1A甲基化联合检测灵敏度较高,联合检测SHOX2和RASSF1A甲基化有望成为肺癌早期诊断的生物标记物。