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第一部分TREM-1通路在脓毒血症中的表达及机制研究[目的]研究TREM-1分子在脓毒血症各类炎性细胞上的表达及TREM-1通路在脓毒血症发病中的作用机制。[方法]构建BALB/c小鼠腹腔脓毒血症模型，收获腹腔细胞，应用流式细胞仪检测TREM-1分子在各类炎性细胞上的表达；分离正常小鼠腹腔巨噬细胞，加入铜绿假单胞菌共培养，在培养液中加入TREM-1融合蛋白封闭TREM1/DAP12通路，应用瑞氏染色技术检测巨噬细胞吞噬能力变化，应用ELISA技术检测巨噬细胞分泌炎性因子水平变化，应用实时定量PCR技术检测巨噬细胞表面协同刺激分子表达水平；构建BALB/c小鼠腹腔脓毒血症模型，使用TREM-1融合蛋白及对照IgG进行治疗，对脓毒血症小鼠生存时间进行统计；构建BALB/c小鼠腹腔脓毒血症模型，使用TREM-1融合蛋白及对照IgG进行治疗，24小时后处死小鼠，收获外周血用于分析血清中IL-1、TNF-α、MCP-1等炎性因子水平变化，收获腹腔细胞应用流式细胞仪检测CD40、CD86等协同刺激分子在巨噬细胞上的表达变化。[结果] TREM-1分子大量表达于小鼠中性粒细胞和巨噬细胞上，而在淋巴细胞上不表达，且在铜绿假单胞菌急性感染引起的脓毒血症模型中，TREM-1分子在巨噬细胞及中性粒细胞上的表达明显增高；使用TREM-1融合蛋白阻断该通路后显著延长脓毒血症小鼠死亡时间；使用TREM-1融合蛋白阻断该通路后在体内外均能显著降低巨噬细胞分泌IL-1、TNF-α、MCP-1等炎性因子能力，但对巨噬细胞吞噬功能无显著影响；使用TREM-1融合蛋白阻断该通路后在体内外均能显著降低其表面CD40、CD86等协同刺激分子表达，从而影响巨噬细胞抗原提呈功能。[结论] TREM-1通路表达于脓毒血症相关巨噬细胞与中性粒细胞，阻断该通路可以显著减少巨噬细胞释放IL-1、TNF-α等炎性因子能力，且显著降低巨噬细胞活化、抗原提呈功能，从而显著降低脓毒血症发生时过度放大的炎性反应，最终明显延长脓毒血症小鼠存活。第二部分研究Tim-3信号通路和Th17细胞的相关性以及在肺炎克雷伯菌感染引起的肺炎中的作用[目的]研究Tim-3信号通路和Th17细胞的关系以及在急性肺炎发病时的作用机制。[方法]分离正常小鼠脾脏淋巴细胞，加入特定的细胞因子诱导T细胞向Th17细胞分化，一段时间后检测Th17细胞上Tim-3分子表达水平，且加入Galectin-9激活Tim-3通路后检测Th17细胞凋亡变化；建立BALB/c小鼠肺炎克雷伯菌急性肺炎感染模型，使用Galectin-9或对照PBS治疗急性肺炎小鼠，记录各组小鼠存活时间；建立BALB/c小鼠肺炎克雷伯菌急性肺炎感染模型，使用Galectin-9或对照PBS治疗急性肺炎小鼠，不同时间点处死小鼠并收获外周血血清检测IL-17、IFN-γ、IL-4、G-CSF、MIP-2等细胞因子水平，同时检测脾脏CD4+及CD8+T细胞绝对值、外周血中性粒细胞绝对值、肺组织内细菌含量等指标变化。[结果]脾脏淋巴细胞经CD3抗体、CD28抗体、TGF-β、IL-6诱导后明显向Th17细胞分化，且流式检测结果显示Tim-3分子在诱导的Th17细胞上大量表达，达到65%；经诱导的Th17细胞加入Galectin-9激活Tim-3通路后可以引起Th17细胞凋亡增加，从而显著降低IL-17分泌；体内使用Galectin-9融合蛋白治疗肺炎克雷伯菌感染引起的急性肺炎可以加速小鼠死亡，原因可能为使用Galectin-9激活Tim-3通路后减少IL-17与IFN-γ水平，从而显著降低G-CSF和MIP-2分泌。G-CSF和MIP-2分泌减少造成中性粒细胞增殖过少，不足以对抗体内的肺炎克雷伯菌，从而造成大量细菌在肺组织内繁殖，加速肺炎小鼠死亡。[结论] Tim-3分子在Th17细胞上表达且激活Tim-3通路同样引起Th17细胞凋亡。使用Galectin-9激活该通路后可以显著降低体内外IL-17水平，间接引起中性粒细胞增殖减少，导致大量细菌在组织内繁殖，从而加速肺炎小鼠的死亡。第三部分CD4~+T细胞、CD8~+T细胞及DC细胞通过Tim-3信号通路调节脓毒血症小鼠存活[目的]研究Tim-3分子在脓毒血症各类炎性细胞上的表达及Tim-3通路调节脓毒血症的作用机制。[方法]构建铜绿假单胞菌腹腔感染引起的BALB/c小鼠脓毒血症模型，收获小鼠腹腔总细胞，使用流式细胞仪检测Tim-3分子在各类炎性细胞上的表达；构建铜绿假单胞菌腹腔感染引起的BALB/c小鼠脓毒血症模型，给予Tim-3封闭蛋白或对照IgG进行治疗，观察各组小鼠存活时间，并定期处死小鼠收获血清检测IL-1、TNF-α、IFN-γ、IL-4等炎性因子变化；体外分离小鼠脾脏淋巴细胞，加入LPS进行诱导，加入Tim-3封闭蛋白阻断该通路，48小时后检测各类炎性因子分泌变化，检测阻断该通路后淋巴细胞增殖、凋亡等功能变化；构建小鼠脓毒血症模型，给予Tim-3封闭蛋白或对照IgG进行治疗，检测外周血及腹腔炎性细胞数量及铜绿假单胞菌细菌含量，体内检测淋巴细胞、DC细胞增殖、活化改变，检测巨噬细胞吞噬、凋亡改变。[结果] Tim-3分子在脓毒血症腹腔CD4~+T细胞、 CD8~+T细胞、CD11c~+DC细胞上表达，而在中性粒细胞、巨噬细胞上不表达，且脓毒血症时Tim-3分子在腹腔CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、CD11c~+DC细胞上和正常小鼠相比，表达显著增高，分别达到28%、38%及23%；使用Tim-3封闭蛋白阻断该通路后可以显著降低IL-1、TNF-α、IFN-γ等炎性因子分泌，从而显著延长脓毒血症小鼠存活；体外使用Tim-3封闭蛋白阻断该通路引起淋巴细胞增殖与活化减少、但凋亡增加；体内使用Tim-3封闭蛋白治疗脓毒血症小鼠同样减少T淋巴细胞与DC细胞活化；体内使用Tim-3封闭蛋白治疗脓毒血症小鼠对巨噬细胞吞噬功能无影响，但可以增加趋化至腹腔的巨噬细胞绝对值，减少腹腔细菌含量，同时体内阻断该通路可以减少巨噬细胞凋亡。[结论] Tim-3分子表达于脓毒血症腹腔CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、CD11c~+DC细胞，而在中性粒细胞、巨噬细胞上不表达。阻断Tim-3通路降低IL-1、TNF-α、IFN-γ等炎性因子分泌，从而显著延长脓毒血症小鼠存活时间，机制可能为阻断Tim-3信号通路在体内外减少淋巴细胞与DC细胞增殖、活化，但增加其凋亡。此外，阻断该通路还可以增加趋化至腹腔的巨噬细胞数量、减少巨噬细胞凋亡。