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引言骨肉瘤是由间质组织来源的,表现出成骨分化的特性,并且分泌恶性类骨质,它是原发性骨癌最常见的组织学形态。mi RNA是一种核苷酸,大约由18-26个核苷酸组成,也是一类单链RNA分子,它的功能主要是和目标m RNA分子结合,结合位置在m RNA3’端非编码区域,通过mi RNA和目标m RNA的不完全结合(完全结合会降解m RNA)而发挥其调节作用,参与身体多种生物学功能的调控。mi RNAs被报道参与多种生物学过程,如细胞周期,分化,凋亡和转移的调节。早期生长反应蛋白2是由EGR2基因所编码的蛋白质,其具有三个串联的C2H2型锌指转录因子。这个基因突变与常染色体显性遗传腓骨肌萎缩症1型有关。研究报告,mi R-20a能调节EGR2表达水平,而EGR2被证明是与骨肉瘤的肿瘤发生有关。本实验通过研究mi R-20a调节EGR2的表达水平,深入研究mi R-20a在骨肉瘤上表达水平及与骨肉瘤之间的关系。目的本试验旨在研究mi R-20a通过调节EGR2蛋白表达水平,观察其对骨肉瘤的发生、发展、增殖的影响,了解mi R-20a与骨肉瘤之间的关系,从而为骨肉瘤的诊断、治疗提供依据。方法通过荧光定量RT-PCR和western blotting检测实验,了解mi R-20a和EGR2在骨肉瘤和正常组织中的表达水平;通过mi R-20a转染骨肉瘤细胞实验,了解mi R-20a对骨肉瘤发生、增殖的影响;通过荧光素酶活性检测实验了解mi R-20a和EGR2的关系。结果1.通过RT-PCR和western blotting发现mi R-20a在骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞呈高表达,而EGR2呈低表达,具有统计学意义,得出mi R-20a、EGR2可作为骨肉瘤的检测指标,由于两者在骨肉瘤组织中表达成反向,提示两者之间可能存在负向关系。2.通过mi RNA-20a转染骨肉瘤细胞,利用MTT细胞增殖实验、平板克隆形成试验、流式细胞仪检测细胞周期等试验方法,发现mi RNA-20a可以作为一种肿瘤促进mi RNA,上调或下调mi RNA-20a能明显影响骨肉瘤细胞的生长、增殖、侵袭、迁移,同时证明mi RNA-20a与EGR2存在负相关性。但是mi RNA-20a是否通过负调控EGR2而影响骨肉瘤的生物学功能需要进一步验证。3.通过构建EGR2靶基因3‘UTR载体,利用荧光素酶活性检测实验,发现EGR2是mi RNA-20a的其中一个靶基因,mi RNA-20a可以通过直接抑制EGR2的表达来影响骨肉瘤的增殖、凋亡以及侵袭和转移。结论通过实验证实mi R-20a在骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞呈高表达,,而EGR2在骨肉瘤中呈低表达,表明mi R-20a、EGR2可作为骨肉瘤检测诊断指标;通过细胞转染实验证实,mi R-20a能明显影响骨肉瘤细胞的生长、增殖、侵袭、迁移,可作为一种肿瘤促进mi RNA影响骨肉瘤的生物学性能;利用靶点试验验证EGR2是mi RNA-20a的靶基因,mi RNA-20a可以通过负调控EGR2的表达来影响骨肉瘤的增殖,凋亡以及侵袭、转移。通过以上实验证明mi R-20a、EGR2可作为骨肉瘤诊断的检测指标,利用mi R-20a通过调节EGR2影响骨肉瘤的生物学性能的作用机制,为将来骨肉瘤的治疗提供了新的方向。