溃疡性结肠炎（ulcerative colitis, UC）是炎症性肠病（inflammatorybowel disease, IBD）的一种，其发病机制尚不十分明确，一般认为是由包括感染在内的环境因素作用于易感倾向个体，诱发异常免疫反应所致。大量研究表明，免疫因素是其最基本的发病机制。CD4+T细胞的T辅助（T helper, Th）1/Th17细胞具有促炎症生成的特点，在UC肠道免疫反应过程中的作用越来越得到重视。在各种抗原的刺激下，Th1/Th17细胞的特异转录因子被激活，介导其发生免疫应答，继而分泌相关的细胞因子，如干扰素（interferon-γ, IFN-γ），白介素-6（interleukin-6, IL-6）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α, TNF-α），白介素-17（interleukin-17, IL-17）等，这些细胞因子具有强大的募集和激活嗜中性粒细胞、调节细胞免疫应答、清除细胞内的病原体和诱导T细胞活化等功能，进而诱导并促进炎症的发生，最终启动UC的发病。1,25-二羟基维生素D3（1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25（OH）₂D₃）是维生素D（Vitamin D, VitD）的活性代谢产物，属于开环甾类化合物激素。1,25（OH）₂D₃除了调节钙和骨的代谢外，因免疫细胞中存在其受体（vitamine D receptor, VDR），故具有其相关的生物活性。维生素D通过与单个核细胞、巨噬细胞及致敏淋巴细胞等免疫细胞表面的VDR结合调节Th细胞，尤其是Th1/Th17细胞的功能，进而抑制自身免疫性疾病的发展。VitD产生和/或作用不足参与粘膜损伤的发生，使消化道感染的风险增高，增加UC发病的危险。大量研究表明，VitD缺乏与UC的发病有关，补充VitD可以降低UC的发病率。目的：探讨VitD对右旋葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate,DSS）诱导的慢性实验性结肠炎的治疗作用及其作用机制，以期为临床UC的维持治疗提供一种新的有效药物。方法：①30只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表随机分入Control组、DSS组和DSS+VD组，每组10只。Control组一直饮用蒸馏水；DSS组和DSS+VD组间断饮用2%DSS，时间段为分别为第1～5天、第8～12天、第15～19天、第22～26天、第27和第28天，其余时间饮用蒸馏水。造模第14天起开始治疗：DSS+VD组给予1,25（OH）₂D₃（0.2μg/25g/天）灌胃，治疗14天；Control组与DSS组给予等体积PBS灌胃14天作为对照，第29天处死小鼠。②每天观察小鼠精神状态、体重变化、活动情况、毛发光泽度、进食以及大便性状，并评估疾病活动指数（disease activity index,DAI）。③观察结肠形态学变化，测量结肠长度，并计算结肠的形态学和病理学评分。④检测结肠组织髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）的含量。⑤检测各组小鼠血清钙的水平。⑥提取肠系膜淋巴结（mesenteric lymphnodes, MLN）中的单个核细胞并计数，应用ELISA检测其上清液中的IL-17、TNF-α、IL-6和IFN-γ的水平。⑦应用HE染色观察结肠组织的病理学改变。⑦应用免疫组织化学染色、Western blot技术和real-time Q-PCR技术分别检测结肠组织中IL-17、TNF-α、IL-6和IFN-γ蛋白及mRNA的表达水平。结果：①在慢性实验性结肠炎小鼠模型中，与Control组相比较，DSS组小鼠体重明显下降（15.5%±1.50%vs0.0%±0.0%, P<0.05），而DSS＋VD组小鼠体重较DSS组显著回升（5.2%±0.53%vs19.6%±1.82%,P<0.05）；与Control组相比，DSS组动物DAI评分显著增加（3.77±0.36vs0.00±0.00, P<0.05），经过治疗后，DSS＋VD组DAI评分显著降低（1.79±0.19vs3.77±0.36, P<0.05）。②与Control组相比，DSS组小鼠结肠长度显著缩短（4.35cm±0.48cm vs5.98cm±0.44cm, P<0.05），结肠壁充血、水肿明显，形态学评分升高（2.50±0.58vs0.00±0.00, P<0.05），结肠病理学观察显示黏膜上皮缺损，浅溃疡生成，腺体破坏或消失，可见黏膜层、黏膜下层甚至肌层有大量炎症细胞浸润，病理评分显著增加（9.80±1.26vs0.00±0.00, P<0.05）；而经过治疗后，DSS＋VD组结肠长度显著增加（3.78cm±0.89cm vs4.35cm±0.48cm, P<0.01），病理评分较DSS组显著降低（7.00±0.82vs9.80±1.26, P<0.05），结肠壁充血、水肿明显减轻（1.50±0.58vs2.50±0.58, P<0.05），结肠组织病理切片结果提示黏膜上皮相对完整，无溃疡生成，炎症细胞浸润明显减少。③与Control组相比，DSS组结肠MPO活性升高（1.30U/g±0.09U/g vs0.18U/g±0.01U/g, P<0.05），而经过治疗后，DSS＋VD组MPO活性显著降低（0.41U/g±0.03U/g vs1.30U/g±0.09U/g,P<0.05）。④血钙检测结果显示，Control组、DSS组和DSS+VD组血钙的浓度分别为2.50±0.03mmol/L，2.33±0.06mmol/L，3.33±0.32mmol/L，各组间比较均无统计学意义，P>0.05。⑤DSS组MLN中的单个核细胞数显著多于Control组（6.56×10⁶±0.06×10⁶/mL vs1.63×10⁶±0.27×10⁶/mL,P<0.01），经过治疗后， DSS+VD组细胞数显著下降（3.51×10⁶/mL±0.18×10⁶/mL vs6.56×10⁶±0.06×10⁶/mL, P<0.01）。ELISA检测MLN单个核细胞上清液中IL-17、TNF-α、IFN-γ和IL-6的水平显示：Control组MLN单个核细胞未经刺激前IL-17、TNF-α、IFN-γ和IL-6的分泌水平为（IL-17:0.22ng/mL±0.04ng/mL, TNF-α:0.046ng/mL±0.004ng/mL, IFN-γ:0.02ng/mL±0.01ng/mL, IL-6:0.012ng/mL±0.01ng/mL），经CD3/CD28刺激后上述因子的水平都显著增高（IL-17:1.85ng/mL±0.14ng/mL, TNF-α:0.068ng/mL±0.006ng/mL, IFN-γ:1.43ng/mL±0.15ng/mL,IL-6:0.15ng/mL±0.01ng/mL, P<0.01），与Control组相比，DSS组小鼠MLN单个核细胞刺激前IL-17、TNF-α、IFN-γ和IL-6分泌水平（IL-17:0.58ng/mL±0.10ng/mL, TNF-α:0.17ng/mL±0.02ng/mL, IFN-γ:0.61ng/mL±0.12ng/mL, IL-6:0.14ng/mL±0.01ng/mL, P＜0.01）与CD3/CD28刺激后的分泌水平（IL-17:12.23ng/mL±1.03ng/mL, TNF-α:0.35ng/mL±0.04ng/mL, IFN-γ:6.67ng/mL±0.46ng/mL, IL-6:0.47ng/mL±0.06ng/mL, P＜0.01）均显著高于Control组，给予1,25（OH）₂D₃治疗后，未刺激的DSS+VD组小鼠MLN单个核细胞分泌的细胞因子水平较DSS组明显降低（IL-17:0.38ng/mL±0.04ng/mL vs0.58ng/mL±0.10ng/mL, TNF-α:0.13ng/mL±0.01ng/mL vs0.17ng/mL±0.02ng/mL, IFN-γ:0.41ng/mL±0.13ng/mL vs0.61ng/mL±0.12ng/mL, IL-6:0.07ng/mL±0.01ng/mL vs0.14ng/mL±0.01ng/mL, P＜0.01），同样CD3/CD28刺激后IL-17、TNF-α、IFN-γ和IL-6的分泌水平较DSS组也明显降低（IL-17:6.35ng/mL±0.34ng/mL vs12.23ng/mL±1.03ng/mL, TNF-α:0.24ng/mL±0.02ng/mL vs0.35ng/mL±0.04ng/mL, IFN-γ:4.45ng/mL±0.41ng/mL vs6.67ng/mL±0.46ng/mL, IL-6:0.43ng/mL±0.04ng/mL vs0.47ng/mL±0.06ng/mL, P＜0.01）。⑥免疫组织化学染色可见：在Control组，炎症因子IFN-γ、TNF-α、IL-17和IL-6仅有少量表达，DSS组小鼠结肠组织中上述4中蛋白表达水平较Control组显著增加（IL-17:0.70±0.10vs0.17±0.05, P<0.05; TNF-α:0.85±0.10vs0.25±0.05, P<0.05; IL-6:0.65±0.07vs0.10±0.01, P<0.05; IFN-γ:0.90±0.10vs0.20±0.05, P<0.05），经过治疗后，DSS+VD组的表达水平较DSS组显著下降（IL-17:0.40±0.08vs0.70±0.10, P<0.05; TNF-α:0.35±0.08vs0.85±0.10, P<0.05; IL-6:0.30±0.02vs0.65±0.07, P<0.05; IFN-γ:0.45±0.07vs0.90±0.10, P<0.05）。⑦Western blot和real-time Q-PCR检测结果显示，与Control组比较，DSS组结肠组织中IL-17、TNF-α、IL-6和IFN-γ蛋白（IL-17:1.81±0.10vs1.21±0.05; TNF-α:1.79±0.10vs1.04±0.05, P<0.05;IL-6:1.75±0.13vs1.00±0.05, P<0.05; IFN-γ:2.06±0.10vs1.32±0.05, P<0.05）及mRNA的表达水平显著升高（IL-17mRNA:1.91±0.86vs1.00±0.00,P<0.05; TNF-α mRNA:1.94±0.64vs1.00±0.00, P<0.05; IL-6mRNA:2.04±0.02vs1.00±0.00, P<0.05; IFN-γ mRNA:2.11±0.11vs1.00±0.00,P<0.05）。经过治疗之后，IL-17、TNF-α、IL-6和IFN-γ蛋白（IL-17:1.48±0.08vs1.81±0.10, P<0.05; TNF-α:1.44±0.08vs1.79±0.10, P<0.05; IL-6:1.34±0.11vs1.75±0.13, P<0.05; IFN-γ:1.73±0.07vs2.06±0.10, P<0.05）及mRNA的表达均显著下降（IL-17mRNA:1.56±0.30vs1.91±0.86, P<0.05;TNF-α mRNA:1.39±0.67vs1.94±0.64, P<0.05; IL-6mRNA:1.33±0.01vs2.04±0.02, P<0.05; IFN-γ mRNA:1.72±0.40vs2.11±0.11, P<0.05）。结论：1,25（OH）₂D₃对慢性实验性结肠炎小鼠具有保护作用，其机制可能是抑制了Th1/Th17细胞的活化，下调了相关炎症因子的表达。