抗病毒治疗前后HIV/AIDS患者精浆中HIV RNA水平及传播风险研究

来源 :中国医科大学(辽宁) 中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangyiming1
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目的:   艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)是由人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染引起的慢性致死性传染病,主要通过血液途径、性途径以及母婴垂直途径传播。   2010年世界卫生组织全球报告显示,性工作者、男男性行为者(MSM,men whohave sex with men)成为亚洲国家中新发感染者中的核心人群。《2011年中国艾滋病疫情估计》显示,性传播已经成为我国艾滋病传播的最主要途径,防止艾滋病经性途径向一般人群的二代传播成为艾滋病防治工作的重点。   国外研究发现精液是HIV复制地和储存池,是HIV传播过程中病毒的主要载体。高效抗反转录病毒治疗可以降低HIV病毒的复制,延长HIV感染者生存时间的同时也降低了HIV传播风险。   当前国际上有关艾滋病传播风险的评估主要是在HIV单阳夫妇人群开展的观察性研究或者通过建立数学模型的风险评估研究,有关结合精浆中HIV RNA水平这一经性途径传播风险的生物学预测指标分析抗病毒治疗前后HIV传播风险报道较少。在我国,性传播成为主要的HIV传播途径,MSM人群成为HIV新发感染者中的主要人群,加之国内免费抗病毒药物有限,部分抗病毒药物国产化。因此获得我国抗病毒治疗前后HIV/AIDS患者精浆中HIV RNA水平数据,揭示HIV经性传播风险以及抗病毒治疗对降低HIV传播风险的影响,将为我国艾滋病防治工作提供科学依据。   材料与方法:   一、实验材料   (一)、研究对象   2010年12月-2012年3月间在中国医科大学附属第一医院红丝带门诊随访和接受抗病毒治疗的32例HIV/AIDS患者,均为MSM途径感染者。   (二)、主要试剂   1)EDTA抗凝负压真空采血管(美国BD公司)   2)10×免洗溶血素(美国BD公司)   3)Anti-CD3单克隆抗体(美国BD公司)   4)CD4 FITC/CD8 PE/CD3 PerCP及绝对计数管(美国BD公司)   5)淋巴细胞分离液(Ficoll-Paque PLUS,美国GE公司)   6)鞘液(中国山东兰桥医学科技有限公司)   7)NucliSENS()EasyQ HIV-1 Test试剂盒(法国生物梅里埃公司)   (三)、主要仪器   1)流式细胞仪FACS Calibur(美国BD公司)   2)NucliSENS()EasyQ Analyzer核酸扩增实时检测分析系统   3)NucliSENS()mini MAG核酸提纯系统   4)Ⅱ级生物安全柜NU425-400E(美国NEWAIR公司)   5)X-15R高速冷冻离心机(美国BECKMAN COMLTER公司)   6)20μl、200μl和1000μl加样器(法国吉尔森公司)   7)ThermoStat plus恒温孵育器   二、实验方法   (一)、样本采集与处理   1)血液样本采EDTA抗凝全血,室温下离心10分钟(2000g),分离血浆,分装(1 ml/管)后保存于-80℃冰箱备用。   2)精液样本受检者在采样前至少48h-72h内避免性接触,采样时先洗手和阴茎,然后用消毒湿纸巾擦净阴茎头,通过手淫法采集精液。高速离心(3000g,20分钟)后,吸出上清液(即精浆)分装(0.3 ml/管),-80℃冰箱冻存备用。   (二)、信息收集   由经培训的专业人员采用标准化结构问卷,收集患者的人口社会学、临床及流行病学信息。   (三)、HIV感染者疾病分期   参考成人和青少年世界卫生组织(WHO)HIV感染临床分期体系(2006版本),将HIV感染者进行疾病分期。   (四)、CD4+T淋巴细胞绝对值检测   应用FACS Calibur流式细胞仪进行检测,MμltiSET软件分析结果,得到CD4+T淋巴细胞的绝对值。   (五)、精浆与血浆中HIV RNA测定   精浆和血浆样本采用NucliSens EasyQ HIV病毒载量试剂盒进行核酸分离、扩增后,利用NucliSens EasyQ分析仪进行检测。使用NucliSens HIV-QT试剂盒(法国bioMerieux公司),全套试剂包括裂解缓冲液、分离试剂、扩增试剂和检测试剂4个部分:实验操作按说明书进行。   (六)、统计学分析   应用SPSS13.0软件包进行统计分析,HIV病毒载量数据以对数(log)表示,均值比较采用t检验,采用spearman秩相关分析,P<0.05为有统计学意义标准。   实验结果:   本研究共同时检测血浆和精浆样本各37份,其中未治疗HIV感染者16份,接受抗病毒治疗患者样本21份,分析抗病毒治疗前后HIV感染者和艾滋病患者精浆和血浆中HIV RNA水平,结果如下:   一、未接受抗病毒治疗的HIV感染者精浆与血浆HIV RNA水平   共检测未治疗的HIV感染者精浆和血浆样本各16份。5份HIV-1阴性健康对照精浆中未检出HIV RNA。血液中CD4水平最低为5个/μl,最高为850个/μl。精浆与血浆中HIV RNA均值分别为2.83 log copies/ml和3.82 log copies/ml,配对样本t检验显示,二者差值的均值为0.99 log copies/ml,精浆中HIV RNA显著低于血浆HIV RNA水平(t=3.112,p=0.007)。精浆中有6份样本(6/16)HIV RNA小于最低检测限(
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