【摘 要】
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目的:研究人VEGF基因通过慢病毒转染脂肪源间充质干细胞后,诱导其成骨分化作用。方法:体外传代培养脂肪源间充质干细胞并放置细胞培养箱保存,自Gene Bank中查找VEGF基因序列,
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目的:研究人VEGF基因通过慢病毒转染脂肪源间充质干细胞后,诱导其成骨分化作用。方法:体外传代培养脂肪源间充质干细胞并放置细胞培养箱保存,自Gene Bank中查找VEGF基因序列,PCR扩增目的基因片段,构建携带人VEGF基因的慢病毒载体于239T细胞内增殖并后纯化,检测病毒滴度。体外将传代培养的脂肪源间充质干细胞均匀分为VEGF-CD513B-1,CD513B-1,正常细胞三组并分别加入重组慢病毒,未重组慢病毒,生理盐水共培养,检测培养后脂肪源间充质干细胞活性及VEGF表达量。而后对脂肪源间充质干细胞进行成骨诱导,茜红染色检验骨结节生成情况评估VEGF基因对脂肪源间充质干细胞成骨诱导作用。结果:慢病毒转染后的脂肪间充质干细胞增殖速度减缓,到达平台期时间稍长,最终细胞数与正常h AMSC相当,h AMSC成骨诱导后,基因和蛋白水平VEGF和BMP2在实验组均有所增高,但增高倍数不显著;成骨诱导后,茜素红染色显示各组均有骨结节生成,但差异明显。VEGF重组腺病毒转染脂肪源间充质干细胞组骨结节生成明显高于其余二组。结论:VEGF对脂肪间充质干细胞成骨诱导作用明显,且通过慢病毒转基因技术可明显提高脂肪间充质干细胞成骨作用。
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