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目的:1.明确组蛋白脱乙酰化酶抑制剂Tubastatin A协同替莫唑胺对胶质瘤细胞耐药株的杀伤作用;2.探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂Tubastatin A协同替莫唑胺杀伤胶质瘤细胞耐药株的机制。材料与方法:构建四种不同胶质瘤细胞系耐药株,预先用Tubastatin A处理后,采用CCK-8法、Caspase-3凋亡检测法、Hoechst 33342/PI双染法及Tunel法检测细胞活力及凋亡状态。采用蛋白质印记实验及免疫共沉淀实验检测各个细胞系中组蛋白脱乙酰化酶6相关细胞信号通路的基因表达情况及相应分子之间作用。实验数据均采用SPSS19统计软件进行数据分析处理,所有定量实验至少独立重复3次,图中的数据为平均值±标准差(mean±S.D.)。多组样本方差假设相同市采用独立样本t检验,多组样本方差明显不同时,在用Bonferroni实验矫正后采用Anova检验。P<0.05为差异具有统计学意义。结果:1.Western blotting结果显示:GRP78,磷酸化IRE1α,HDAC6在肿瘤组织样本的表达水平高于正常脑组织中的表达水平;p97/VCP在肿瘤组织样本的表达水平低于正常脑组织中的表达水平。GRP78,磷酸化IRE1α,HDAC6在TMZ耐药株中的表达水平高于亲本株中的表达水平;p97/VCPTMZ耐药株中的表达水平低于亲本株中的表达水平。2.细胞活力及凋亡检测结果显示:CCK-8法检测四种不同胶质瘤细胞系中,TUB与TMZ联合加药组中细胞凋亡情况明显高于TUB单独加药组;四种肿瘤细胞系联合用药组的50%抑制浓度分别为A172组:15.5μM(P<0.05);U118组:8.2μM(P<0.05);U251组:11.7μM(P<0.05);U87组:17.3μM(P<0.05)。Caspase-3活性检测四种不同胶质瘤细胞系中,TUB与TMZ联合加药组中细胞凋亡情况明显高于TUB单独加药组。Hoechst 33342/PI双染法检测A172胶质瘤细胞系,TUB与TMZ联合加药组中细胞凋亡情况明显高于TUB单独加药组。Tunel法检测A172胶质瘤细胞系,TUB与TMZ联合加药组中细胞凋亡情况明显高于TUB单独加药组。3.Western blotting结果显示:在胶质瘤细胞系U87和U118中,TUB与TMZ联合加药组中未折叠蛋白质反应及内质网应激相关通路蛋白较TUB单独加药组中升高。4.Western blotting及免疫共沉淀结果显示:在胶质瘤细胞系U87和U118中,TUB与TMZ联合加药组中热休克反应相关通路蛋白较TUB单独加药组中降低。5.Western blotting、免疫共沉淀及免疫荧光结果显示:胶质瘤细胞系U87和U118中,TUB与TMZ联合加药组中HDAC6介导的相关自噬通路相关蛋白功能较TUB单独加药组中减弱;TUB与TMZ联合加药组中p97/VCP介导的相关泛素-蛋白酶体通路相关蛋白功能较TUB单独加药组中增强。结论:1.胶质瘤细胞的TMZ耐药性与内质网应激耐受机制呈正相关;2.胶质瘤细胞的内质网应激耐受机制发生与胞内HDAC6-p97/VCP的浓度平衡(HDAC6上升-p97/VCP下降)有关;3.HDAC6选择性抑制剂TUB抑制HDAC6的去乙酰化与泛素结合能力,逆转了细胞内HDAC6-p97/VCP的浓度,从而阻止内质网应激耐受机制的发生。4.TUB与TMZ协同作用加强了对TMZ耐药细胞的杀伤。