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目前有学者认为,部分卵巢高级别浆液性腺癌(high grade serous cancer,HGSC)可能起源于输卵管伞端上皮细胞(主要是输卵管上皮分泌细胞),在各种因子或环境等的刺激下出现“P53印迹”,随后出现输卵管上皮内癌(serous tubal intraepithelial carcinoma, STIC),最后成为侵袭性的浆液性腺癌[1,2]。上皮细胞-间充质细胞转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)指上皮细胞在形态学上发生成纤维细胞或间充质细胞表型的转变并获得迁移的能力,与组织重建再生、肿瘤的发生发展、转移密切相关。有研究表明,正常上皮细胞在各种因素作用下可发生EMT,参与致瘤[3]。高迁移率蛋白A2 (High mobility group proteinA2, HMGA2)是HMGA家族成员之一,其表达水平与肿瘤的恶性程度、转移机率及预后密切相关[4]。目前国内外很多研究都集中在"P53印迹”出现之后,尤其是STIC,但对“P53印迹”出现之前细胞的变化研究较少,而研究该阶段出现的事件能为掌握HGSC的发生机制、研究早期诊断及早期靶向干预奠定基础。籍于此,本研究探讨了FSH作用于FTE后细胞是否发生EMT,且探究HMGA2在此过程中发挥的作用。第一部分HGSC和LGSC肿瘤未累及输卵管伞端的鉴别目的：了解在P53突变之前,HGSC中未累及的输卵管伞上皮细胞的某些指标是否已经发生了变化。方法：方法选择输卵管未累及的卵巢上皮高级别浆液性腺癌28例,低级别浆液性腺癌24例,另取因盆底功能障碍而切除全子宫双附件5例做对照。选取输卵管伞端组织行免疫组化检测。基因突变指标：P53；增殖指标：pAKT;血管内皮生长因子：VEGF;转移指标：E-cadherin;侵袭指标：MMP-2;肿瘤微环境指标：COX-2。结果：高级别浆液性腺癌伞端的pAKT和COX-2表达明显高于低级别浆液性腺癌(分别为61% vs 8%和71 %vs 21%,P=0.005和0.007,).低级别浆液性腺癌伞端E-Cadherin的表达明显高于高级别浆液性腺癌(83% vs 21%,P=0.003)。 MMP-2, VEGF和p53在高、低级别浆液性腺癌中的表达差异无统计学意义(分别为21% vs 13%,25% vs 21%和14% vs 8%,P=0.78,0.86和0.82)。结论：高级别浆液性卵巢腺癌中未受肿瘤累及的伞端细胞在p53突变发生前其增生、粘附力及炎症微环境就可能已经发生了变化。第二部分卵泡刺激素FSHHGSC伞端上皮细胞发生EMT目的：了解FSH能否促进HGSC伞端上皮细胞发生EMT方法：取前期已成功原代培养的低级别浆液性腺癌、高级别浆液性腺癌肿瘤未累及、P53(-)的输卵管伞端上皮细胞。将FSH以不同浓度(0、10、20、40、 80、160mIU/mL)和不同时间(分别作用于0、12、24、48、72h)作用于FTE,观察细胞形态变化情况。Western-blot检测EMT标志物E-Cadherirn、 N-Cadheriin、波形蛋白(Vimentin)、MMP-2及P53蛋白表达情况。RT-PCR检测mRNA表达情况。结果：FSH浓度为40mIU/ml作用于HGSC的FTE细胞48h后,上皮细胞外形演变为纺锤形纤维细胞形态,EMT标志物E-Cadherin明显下调,而N-Cadherin、Vimentin、MMP-2明显上调,且呈FSH浓度-作用时间依赖性,初步证实了发生EMT。而在LGSC未见这些变化。FSH的作用不能促进P53蛋白表达改变。结论：FSH促进了HGSC伞端上皮细胞发生EMT。第三部分：HMGA2介导FSHHGSC输卵管伞端上皮发生EMT目的：了解]HMGA2在FSH促进HGSC输卵管伞端上皮发生EMT中的作用。方法：取前期已成功原代培养的HGSC中瘤未累及、P53(-)的输卵管伞端上皮细胞。将FSH以不同浓度(0、0、20、40、80mIU/mL)和不同时间(分别作用于0、12、24、48、72h)作用于FTE。 Western-blot检测HMGA2蛋白表达情况。RT-PCR检测let-7b mRNA表达情况。FTE细胞转染]HMGA2 shRNA后,浓度为40mIU/mL的FSH作用,观察细胞是否发生EMT及EMT相关分子E-cadherin, MMP-2, N-cadherin,vimentin蛋白表达变化情况。观察分子生物学方法敲除let-7b后,HMGA2蛋白表达情况。结果：FSH作用HGSC的FTE细胞后,HMGA2蛋白表达逐渐增加,let-7b mRNA表达逐渐降低,并呈浓度-时间依赖性。FTE细胞转染HMGA2 shRNA后,FSH不能促进FTE细胞发生EMT,且EMT相关分子E-cadherin, MMP-2, N-cadherin,vimentin蛋白表达量均未出现明显变化。Anti-let-7b转染FTE细胞后,HMGA2蛋白表达升高。结论:HMGA2在介导FSH促进FTE发生EMT中起了重要作用。let-7b能够调控HMGA2的表达。综上所述,FSH促进了HGSC伞端上皮细胞发生EMT,且最佳条件为浓度40mIU/ml、作用时间48h。 FSH能调控FTE中let-7b的下调并通过其而上调HMGA2的表达。HMGA2介导FSH促进HGSC的FTE细胞发生EMT,而在LGSC中未发现这种现象。本课题的研究结果提示了FSH通过HMGA2在人类高级别卵巢浆液性腺癌中具有促进肿瘤进展的作用,并初步探索了相关的分子调节机制,为进一步阐明高级别浆液性卵巢腺癌发生、发展的机制提供了新的思路,并为其的诊断、治疗提供了可能的新线索。