目的建立动物模型,采用免疫组化、RT-PCR、Western免疫印迹分析方法,检测雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)下游底物核糖体蛋白S6激酶(p70 S6 Kinase,p70 S6K)在正畸牙移动牙周组织改建过程中的表达及变化,研究正畸力作用下兔牙周组织中核糖体蛋白S6激酶(p70 S6K)在牙周组织改建过程中的作用。方法1、建立动物模型选用36只日本大耳白兔(体重2.0±0.2kg),建立正畸牙移动的动物模型,按照3天、5天、7天、14天随机分组,每组9只。上颌右侧戴矫治器为实验组,分别在切牙与磨牙的近颈端缠绕双股结扎丝,然后在切牙与磨牙间放置镍钛螺簧,力值80g,使磨牙近中移动。上颌左侧未戴矫治器为对照组。实验动物分别于3、5、7、14天处死。2、免疫组化SP法将实验组及对照组牙周组织石蜡标本进行核糖体蛋白S6激酶(p70 S6 Kinase,p70 S6K)免疫组化染色,观察其表达并分析其意义。3、RT-PCR按逆转录试剂盒使用说明操作,选用oligo dT作引物合成第一链cDNA,RT-PCR检测正畸力作用下p70 S6K在牙周组织中的表达变化,琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色分析检测结果。4、Western免疫印迹分析吸取上清,弃沉淀,考马斯亮蓝法测定样品中蛋白浓度。上清用10%SDS-PAGE分离然后转移到PVDF膜上,经2h 50V的转印后TTBS洗膜5 min×3次。用含5%BSA的TTBS封闭,4℃过夜,再与抗p70 S6K抗体室温孵育2h,与相应的HRP标记的羊抗兔二抗(1∶5000)室温孵育1h,ECL系统显影。5、统计学分析应用SPSS 11.5统计软件对戴矫治器组与未戴矫治器组进行配对t检验。P＜0.05为显著性差异。结果1、组织形态学观察组织形态学观察实验组的牙周组织较对照组有明显改建,牙槽骨由致密变得疏松,细胞的排列由有序变紊乱,牙槽骨的骨壁由平整变得凸凹不平,出现了破骨细胞及骨陷窝。2、p70 S6K在牙周组发中的定位免疫组化结果:正畸力作用下p70 S6K在牙周组织细胞中染色增强,且主要定位于成纤维细胞、成骨细胞胞浆中,血管内皮细胞及骨细胞胞浆中亦可见。3、RT-PCR与对照组比较,加力3天后牙周组织中p70 S6K mRNA表达增加,7天明显增加,随后下降,3天、7天、14天各时段与对照组比较均有统计学差异,其中7天差异更显著(P＜0.01)。4、Western免疫印迹分析与RT-PCR结果相一致。正畸力作用下p70 S6K在兔牙周组织中的蛋白表达增加,7天尤为显著,随后下降。3天、7天、14天各时段与对照组比较均有统计学差异,其中7天差异更显著(P＜0.01)。结论1、p70 S6K在正畸力作用下兔牙周组织细胞中染色增强,且主要定位于成骨细胞,成纤维细胞胞浆中,血管内皮细胞和骨细胞胞浆中亦可见。2、正畸力作用下兔牙周组织中p70 S6K的表达增加。3、随着牙周组织的改建,p70 S6K的表达量7天时达高峰。4、p70 S6K参与正畸牙移动过程中牙周组织的改建。