巴西苏木素对舌癌Tca8113细胞凋亡和自噬的影响及分子机制

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目的探讨巴西苏木素(Brazilin)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其分子机制,为巴西苏木素应用于临床舌癌的治疗提供理论基础。方法用不同浓度梯度巴西苏木素(0、1、5、10、20、30、40、80、100、200μmol/L)处理Tca8113细胞,MTT检测不同浓度巴西苏木素对Tca8113细胞生长活性的影响,并根据结果做出曲线,计算半数抑制率的浓度IC50;使用Hoechst33342染色观察不同浓度巴西苏木素作用24h后Tca8113细胞凋亡形态变化;流式细胞术检测巴西苏木素作用后各组细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2、cleaved caspase3及自噬相关蛋白p-AMPK、p-mTOR、LC3B、p62的表达;使用AMPK通路抑制剂与巴西苏木素共同作用于Tca8113细胞,并检测通路相关蛋白p-AMPK、p-mTOR、LC3B的表达。结果1、巴西苏木素抑制Tca8113细胞增殖MTT结果表明,不同浓度的巴西苏木素对Tca8113细胞的生长有抑制作用,且随着巴西苏木素浓度的增加,抑制作用逐渐增强,经计算,24h时IC50为31.17μmol/L。2、巴西苏木素对Tca8113细胞凋亡的影响Hoechst33342染色结果显示,巴西苏木素作用24h后,细胞核膜消失,胞核碎裂,部分胞核呈“新月状”和“花瓣状”,且该形态变化程度与药物浓度正相关。流式细胞术检测各组凋亡率结果显示,不同浓度巴西苏木素作用24h后,凋亡率随药物浓度增加而升高,且各组细胞凋亡率均高出空白对照组。3、巴西苏木素对细胞凋亡相关蛋白的影响Western blot检测结果显示,巴西苏木素作用后,Tca8113细胞中促凋亡蛋白bax和cleaved-caspase3的表达随巴西苏木素浓度的增大明显增多(P<0.05),抗凋亡蛋白bcl-2表达则明显降低。4、巴西苏木素对自噬相关蛋白的影响Western blot检测发现,随药物浓度增加,自噬正相关蛋白p-AMPK和LC3B表达量逐渐增加,负相关蛋白p-mTOR、p62表达逐渐降低(P<0.05)。在将AMPK抑制剂与巴西苏木素合用后,p-AMPK与LC3B表达量虽仍略高于空白对照组,但与单纯使用巴西苏木素相比均明显降低,而p-mTOR的表达较巴西苏木素组则明显升高。结论1、巴西苏木素能抑制Tca8113细胞生长并通过线粒体途径促进其凋亡。2、巴西苏木素可通过AMPK/mTOR通路诱导细胞发生自噬。
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