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本研究室在对蓝舌病毒中国湖北株-3(BTV-HbC3)长期的研究过程中,注意到BTV-HbC3可以在HeLa细胞,一种来自于人类宫颈癌的细胞,中良好地增殖,而后进一步发现其可以感染其他一些恶性肿瘤细胞。这个现象激发了我们对于一种新的癌症治疗方法的想象:肿瘤的病毒疗法。我们进行了几个实验,以探索BTV-HbC3是否具备成为一种溶癌病毒的潜能。 分别以BTV-HbC3感染几株细胞,包括人胚肺成纤维细胞HEL,人宫颈癌细胞系HeLa,人肺腺癌细胞系SPC-A-1,人星形胶质瘤细胞U251,小鼠星形胶质瘤细胞C6。这样,就能够观察BTV-HbC3引起的细胞病变效应,以考察是否所有的受试细胞都对这种病毒敏感。 在各株受试细胞上滴定BTV-HbC3的组织培养半数感染量TCID50,应用双向免疫扩散实验来检测是否所有感染BTV-HbC3的受试细胞中都有BTV-HbC3抗原出现等方法,考察了受试细胞中子代病毒的增殖能力,借以鉴别BTV-HbC3对正常细胞和肿瘤细胞的感染性的差别。 为了证实双向免疫扩散实验结果的可靠性,我们又应用逆转录聚合酶链反应RT-PCR来探测BTV-HbC3在这些细胞中的复制状况,并借助透射电子显微镜,观察了受试细胞超微结构的形态学改变,清楚地了解BTV-HbC3与细胞相互作用的形态学和形态发生学后果。 试验结果表明:BTV-HbC3能够导致除了人胚肺成纤维细胞之外的所有细胞发生细胞病变效应;在抗-BTV-HbC3免疫血清和除了人胚肺成纤维细胞之外的所有细胞裂解液之间出现了抗原抗体复合物免疫沉淀线;逆转录聚合酶链反应检测到除了人胚肺成纤维细胞之外的所有受试细胞中的BTV-HbC3特异性核酸序列。 但是,我们发现,尽管BTV-HbC3能够在所有的受试肿瘤细胞中复制,但是BTV-HbC3对所有受试细胞的感染性并不相同。 这些实验结果中,一个很重要的指标是透射电子显微镜观察结果。几乎每一株感染BTV-HbC3的肿瘤细胞内都能产生数量不等的蓝舌病毒粒子,有些细胞中大量的病毒颗粒排列成晶格状;以及较多病毒空衣壳。在C6细胞中,我们观察到一些特别的现象:细胞染色质浓缩,在细胞核周边聚集,并且伴随有大小不等的胞浆内空泡和胞浆浓缩,显示了细胞凋亡特征。电镜图像明显地揭示出:(1)上述受试肿瘤细胞均产生了CPE;(2)受试肿瘤细胞出现的CPE分为两类,一种是病毒大量增殖,细胞裂解死亡;另一种是病毒有一定量增殖,并诱导肿瘤细胞凋亡。 根据以上的结果,我们可以得到一个初步的结论,就是BTV-HbC3不感染正常人胚肺成纤维细胞,但是它可以选择性地在肿瘤细胞中增殖并使之产生不同程度的细胞裂解效应或诱导细胞凋亡,最终杀死肿瘤细胞。这些细胞中,人肺腺癌细胞系SPC一A一1对BTV一HbC3有最高的敏感性。实验显示BTV一HbC3具有靶向性杀死某些肿瘤细胞的潜能。尽管其机制尚有待我们进一步深入研究,但这些资料为把BTV一HbC3发展为一种可能的溶癌病毒提供了初步的实验室依据