猪传染性胃肠炎（transmissible gastroenteritis，TGE）能够引起仔猪典型胃肠道症状甚至死亡，其致病原为猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus，TGEV）。TGEV基因组为不分段的单股正链RNA，共编码四种结构蛋白。目前，对TGEV的纤突糖蛋白S抗原表位的研究非常深入，但是针对膜糖蛋白M抗原表位仍有待深入研究。本研究首先通过聚合酶链式反应扩增了去除信号肽的M基因，并将其插入原核表达载体pGEX-6p-1。通过优化蛋白诱导表达的条件，使pGEX-M在“37℃、IPTG终浓度0.5mM、诱导6h”的条件下，在宿主菌Rossetta中成功表达了重组TGEV M蛋白。纯化的重组TGEV M蛋白为制备抗M蛋白单克隆抗体提供了确实的实验材料。同时，以超速离心得到的TGEV颗粒为免疫原、按照经典的单克隆抗体制备方法，成功制备了一株能够产生抗TGEV M蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，命名为7G7。间接免疫荧光结果证明，抗M蛋白单克隆抗体可以识别天然状态下的TGEV颗粒；Western blot结果证明，7G7上清也可以与变性条件下的重组M蛋白发生反应；对单克隆抗体针对的抗原位点进行初步分析，间接ELISA结果表明，抗原位点位于病毒囊膜外侧；对单克隆抗体特异性分析，结果显示，7G7上清仅与TGEV发生反应、并不识别其它猪源病毒。以上结果证明，抗M单克隆抗体可以作为M蛋白抗原位点筛选的良好靶分子。随后以纯化的腹水为靶分子，通过4轮优化的噬菌体筛选步骤，最后随机挑取10个噬菌体蓝斑进行扩增、滴度测定，并检测它们与靶分子的亲和能力。亲和能力检测结果显示，10个随机噬菌体与靶分子之间都具备高度亲和能力。对源于10个随机噬菌体的靶向序列进行测序，结果显示，10个随机噬菌体均携带相同的外源12肽“VHIDPHHQHDQM”，并命名为phage-V。将外源12肽与M蛋白进行序列比对，发现12肽与M蛋白第197至210位氨基酸具有一定的相似性，其中有三个相近位点的氨基酸完全一致（第199位I、第200位D和第203位P）。最终，竞争性阻断的结果表明，phage-V对TGEV或重组M蛋白与单抗的结合起阻断作用，而且这种阻断效果与phage-V的投入量呈正相关。综合以上结果可以证明，通过噬菌体展示技术筛选出的12肽VHIDPHHQHDQM，既可以直接与抗M蛋白单克隆抗体结合，又可以竞争性地阻断病毒或M蛋白与抗体之间的结合，说明该12肽模拟了M蛋白抗原表位；由于12肽中仅3个临近氨基酸与M蛋白完全一致，推测该12肽可能是M蛋白抗原表位的空间构象，而这3个氨基酸所组成的基序可能发挥重要的免疫学作用。本实验将单克隆抗体制备及噬菌体展示技术联合应用，成功筛选出TGEV M蛋白的空间构象型表位，为TGEV M蛋白抗原表位研究填补了空白，并为基于表位的诊断方法建立和抗原表位型疫苗的开发提供了参考。