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灵芝具有多种营养成分并具有多种生理活性和药理作用[1],因此以灵芝孢子粉为原料开发系列功能性食品、保健品与日俱增[2],但至今为止灵芝孢子粉尚未有法定的质量标准,且对灵芝质量的研究多集中于灵芝多糖[3,4,5,6]和灵芝酸(三萜类)[7,8,9,10],而腺苷作为其主要的活性物质之一,对其研究较少[11,12]。本研究建立了灵芝孢子粉腺苷含量的测定方法,并对灵芝多糖的检测方法做了改进,以核苷类物质为参比物建立了灵芝孢子粉的高效液相色谱指纹图谱,指纹图谱可以体现灵芝孢子粉以核苷类为指标的整体特征,考察了批次之间的稳定性,为灵芝孢子粉提供了深层次评价质量的鉴别依据。一.灵芝孢子粉活性物质含量测定的研究目的:建立灵芝孢子粉中腺苷、灵芝多糖含量测定的分析方法,以此为灵芝孢子粉质量控制指标之一。方法:采用10%甲醇溶剂超声提取50min,以0.01mol/L乙酸钠溶液﹕甲醇=85﹕15(V/V)为流动相,UltimateTM AQ-C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,260nm检测波长,HPLC-PDA法测定腺苷的含量;采用紫外分光光度法,用硫酸–蒽酮显色法在625nm波长下测定吸光度值从而测定灵芝多糖的含量。结果:灵芝孢子粉中腺苷含量平均值为258.42μg/g,加标回收率在98.04%～99.64%之间;灵芝多糖含量平均值为1.75%,加标回收率在82.83%～90.00%之间,可以满足腺苷、灵芝多糖含量测定的分析要求。结论:本研究建立的方法适用于灵芝孢子粉中腺苷及灵芝多糖含量的测定,方法选择性强,操作简单快速。二.灵芝孢子粉高效液相色谱指纹图谱研究目的:以腺苷、尿苷等核苷类物质为参比物,建立灵芝孢子粉的高效液相色谱指纹图谱。方法:采用10%甲醇溶剂超声提取30min,以0.01mol/L乙酸钠溶液–甲醇为流动相梯度洗脱,UltimateTM(4.6×250mm,5μm)色谱柱,260nm检测波长,HPLC-PDA法测定。结果:S1～S9样品各色谱之间的相似度在0.925～0.947之间,均在0.900之上;S10样品的相似度为0.827,与0.900比较接近。结论:本研究参照核苷类的色谱条件,简化了梯度程序,建立了灵芝孢子粉的高效液相色谱指纹图谱鉴别方法,考察了十批次灵芝孢子粉的相似度,为其提供了更深层次评价质量的鉴别依据。